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标题:【求助】IEF酸性端的白色斑块是怎么回事呢

idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-3 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】IEF酸性端的白色斑块是怎么回事呢


小女子最近刚开始跑2D，无耐不幸成为本所2D的开山之人，实验中遇到凡此种种的问题，还要烦请各位大侠帮忙解决。
首先是在第一向等电聚焦过后，IPG胶条的泡涨厚度总是不均匀，酸性端总是会厚一点，而且在酸性段总是能肉眼看到白色斑块状的东西，碱性端也有，但是是竖条型的，不知道这到底是什么问题啊，平衡10分钟之后，这些白色的东东就不见了，很神奇的说。
还有，在碱性段靠近电极的位置总是有褐色烧焦的痕迹，不知道是不是因为我的盐离子浓度太高呢，我在样品处理的时候已经用TCA丙酮沉淀除过盐了，为什么还会产生这种情况呢，极其期盼各位大侠给予解答啊，这双向电泳做起来实在是太郁闷了......
ps：褐色的痕迹会留在holder上，有什么办法能把那些痕迹去掉吗？？我用牙刷刷了很久都去不掉呢，呜呜......
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2014-3-3 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

顶起，你遇到的问题我也遇到了
我也是新人啊，还好电泳结果还可以
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发表于 2014-3-3 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酸性端总是会厚一点----正常
碱性段靠近电极的位置总是有褐色烧焦的痕迹---------我没遇见，可能是离子过多
褐色的痕迹会留在holder上，有什么办法能把那些痕迹去掉吗？？我用牙刷刷了很久都去不掉呢------------没遇见国，不过可能是蛋白沉淀，1%SDS+1%DTT 跑一泡再洗
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-3 09:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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头痛
明天就用SDS DTT好好泡泡，不知道holder能不能用稀盐酸泡呢？？会不会腐蚀掉电极呢？？头疼啊...
不过确实是不太会对电泳的结果造成什么影响，只是觉得太奇怪了，太奇怪了，自从做2D以来遇到太多的怪事了
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-3 09:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天又遇到了奇怪的事情，上面提到的黄色印记很神奇的转移到了胶条上，搞得胶条上黄黄的一条，有没有哪位高人能够指点一下那个到底是什么东东啊？？小女子在这里谢谢了先...
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-3-3 09:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

拍个照片看一下吧，这样很难想象哦。
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发表于 2014-3-3 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到过，不过用温水稍微浸泡几分钟后再用无水乙醇擦洗就可以去除聚焦盘上的黄褐色。至于胶条两端出现白色斑块，一方面可能是上样量太高，另一方面可能是样品中盐离子太高。
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发表于 2014-3-3 09:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也觉得可能是上样量太大，下次降低点试试，呵呵
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