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1，二楼说的不对，考马斯亮蓝染胶目的就是为了看看胶上的蛋白电泳的情况，或者看看转膜后胶上蛋白转膜是否彻底。是westernblot的检验步骤之一
2，nc膜比pvdf膜易转穿，不知楼主用的是什么膜？如果用pvdf膜，依楼主的大分子量蛋白一般不会转穿，当然电压和电流也有影响，同时电转液的ph值也有影响，ph大于9易转穿。
3，同意三楼的说法，用丽春红染膜，可以观察蛋白是否转到膜上，丽春红脱色后在继续后续步骤，不影响结果。用预染的彩虹maker电泳也可以观察是否转穿----转穿的话，可以看到膜后面的滤纸上有maker的颜色，但是不能确认是都是哪些蛋白转过了，只能根据maker估计哪些转过。关于膜的孔径，一般pvdf膜有两种规格，0.2微米和0.45微米，一般小于20kd的蛋白采用小孔径膜，通常都用0.45微米的膜。
希望我的建议能给你帮助，祝愿楼主顺利！
也希望楼主能把后续的试验情况一起讨论，大家一起提高！
