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标题:【求助】一抗二抗的稀释问题

wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】一抗二抗的稀释问题

各位好，我刚开始做WESTERN，有些问题想请教各位老手，一抗二抗一般用什么稀释？是现用现稀释吗？ECL法中的A、B液是直接1：1配吗，还用加别的试剂吗？5%的脱脂奶粉一般用什么配好？一抗二抗孵育的时候，用什么东东孵育？显影液定影液（或显影分定影粉）那得好些？问题嫩了点，还望赐教！万分感谢！谢谢
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的一抗是用封闭液稀释的，二抗用TBST；
AB液1：1混合后即可；
封闭液直接买的现成品，不贵，效果也很好；
抗体孵育的时候用杂交袋，可以减少抗体的用量；
显影定影用国产几块一包的即可。
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗二抗既可以用5%脱脂奶粉稀释，也可以用专门的抗体稀释
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

封闭液是PBST配置的5%脱脂奶粉。
一抗稀释用的是 封闭液和PBST 1：1混匀，现用现配，4度过夜。
二抗直接用PBST稀释，37度恒温摇床60转每分钟孵育1小时，
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发表于 2014-3-3 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么我看得这么乱呀？
有PBST、TBST？
这二者有什么区别呀？
谢谢！
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pbst就是pbs加吐温，tbst就是tbs加吐温，
还想请教一下，洗一抗的时候，用TBST洗完还用TBS洗吗？谢谢！
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-3-3 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一问题，就是在封闭之前，还用TBS把膜泡一下吗？
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