蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】western blot 胶片一片黑

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】western blot 胶片一片黑

caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
1

发表于 2014-3-5 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western blot 胶片一片黑


请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
2

发表于 2014-3-5 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 caihong 于 2014-3-5 11:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急

是不是漏了
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2014-3-5 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是很黑的话，曝光的可能性不能排除。
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
4

发表于 2014-3-5 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是就仅仅膜的位置黑
其他还是原样
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
5

发表于 2014-3-5 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主还是说详细一点吧，比如曝光的步骤，过程中有无发现什么异常现象，比如整张膜都有荧光之类的。
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
6

发表于 2014-3-5 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缩短曝光时间
顶部
987789[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75248
精华 0
积分 479
帖子 598
信誉分 100
可用分 3870
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
7

发表于 2014-3-5 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急

==========================

可能原因：
1）抗体浓度过高
2）发光剂太多，没有空一空
3）曝光时间太长
GOOD LUCK
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
8

发表于 2014-3-5 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
缩短曝光时间

================================

先是反应时间为一分钟
而后再显影液中半分钟 定影 液中一分钟
最后用水冲洗
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
9

发表于 2014-3-5 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对了 有个疑问 ，这次做得和过去的不一样
ECL 底片反应液 洗膜后颜色有点发黄 ，很是郁闷那
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
10

发表于 2014-3-5 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 remenb 于 2014-3-5 11:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主还是说详细一点吧，比如曝光的步骤，过程中有无发现什么异常现象，比如整张膜都有荧光之类的。

对了 有个疑问 ，这次做得和过去的不一样
顶部
 15  1/2 12››