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标题:【求助】ELISA标准曲线绘制??

owanaka[使用道具]
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【求助】ELISA标准曲线绘制??


我最近做了2次ELISA,数据出来了但是我不知道标准准曲线应该是什么样的,ELISA试剂盒的说明说没有说是什么形状的,是S形、直线、还是什么?现在有些迷茫不知道怎么处理了,请大家帮忙看看,谢谢了。 并且两次个浓度OD值点的分布形状基本相似。
标准浓度 OD值
0   0.043
10   0.839
25   0.907
50   1.167
100   1.559
250   2.083
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owanaka[使用道具]
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这个是我ELISA试剂盒说明书的介绍, 不知道具体的哪种ELISA方法和曲线有关吗?
I. INTRODUCTION
The OPN ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) kit is an in vitro enzyme-linked immunosorbent assay for the quantitative measurement of OPN in serum, plasma, cell culture supernatants and urine. This assay employs an antibody specific for OPN coated on a 96-well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and OPN present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti- OPN antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of OPN bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.
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eric930[使用道具]
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从你的读数看OD在0-2之间,这时候酶标仪的准确性还是可以的。
稀释倍数和OD值之间并不一定是线性关系的,如果你的操作没有问题,可以用origin 或sigmaplot进行曲线拟和,用logistic,sigmoid之类的曲线可能会把你的数据拟和的比较好!
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owanaka[使用道具]
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十分感谢,但是你说到的 “origin 或sigmaplot进行曲线拟和,用logistic,sigmoid之类的曲线可能会把你的数据拟和的比较好!” 这些我应该怎么样进行拟合呢,我没有用过这些 ,请求再次帮助!谢谢。
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eric930[使用道具]
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可以去网上下载,这两个软件网上都有***版的!而且网上也有相应的教程
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shenkunjie[使用道具]
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实验数据偏差太大,还是丛操作上查找原因吧。游客能实际双线回归的方法。
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wu11998866[使用道具]
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各种方法处理结果其实都很相似
一般试剂双对数处理就可以,排除操作原因,你的数据用多项式拟合看上去更好一些
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zsxan1990[使用道具]
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没有origin和sigmaplot也没关系,可以用EXCEL做双对数图,即把浓度和OD值取对数后,做直线拟合就可以了,可以得出直线方程
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