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标题:【求助】SDS-PAGE

没良心55[使用道具]
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发表于 2014-3-7 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE


5%分离胶
超纯水 2.84ml
30%丙烯酰胺 0.833ml
1.5Mol/LTris Hcl（PH8.8）1.25ML
10%SDS 0.050ml
10%AP 0.025ml
TEMED 0.005ml
IgG F(ab)'2的分子量是92KDa Fc是52KDa
跑出来的结果几个样品总是会联在一起，最后成了一条曲线，该怎么办？


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2014-3-7 16:39
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没良心55[使用道具]
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发表于 2014-3-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

点了四个样！成了抛物线！
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发表于 2014-3-7 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

5%都是做浓缩胶,你怎么直接拿来做分离胶 了啊,至少也要搞7.5%的分离胶啊!
还有你跑的是什么样品呢?
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发表于 2014-3-7 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶有问题
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发表于 2014-3-7 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你如果不还原，分离92KD和52KD用8%左右的胶就可以了。如果你要还原，用12％的胶
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没良心55[使用道具]
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发表于 2014-3-7 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

IgG F(ab)'2 片断和Fc片断
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发表于 2014-3-7 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是样品盐分过高了 ？？
到10%以下，对样品中的无机盐抵抗能力很差的。
样品处理前脱个盐，用一次性滤器装G-10做个脱盐柱。
再就是看你的照片上没有明显的浓缩胶痕迹啊？是不是忘记上浓缩胶了？？
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没良心55[使用道具]
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发表于 2014-3-7 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是之前已经脱过盐了！后来又跑了一次10%的，还是成了那个样子！
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发表于 2014-3-7 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳缓冲液有没有问题，还有怎么是5%的分离胶，电压会不会太高。
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taoshengyijiu[使用道具]
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 小中大
80V的电压!
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