蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】用wester-blot检测cyclin D1和p27蛋白表达的两个问题！

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】用wester-blot检测cyclin D1和p27蛋白表达的两个问题！

BUK[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74485
精华 0
积分 521
帖子 701
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
1

发表于 2014-3-8 09:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】用wester-blot检测cyclin D1和p27蛋白表达的两个问题！


我用wester-blot方法检测cyclin D1和p27的蛋白表达，检测了几次没有做出结果，实验室的人告诉我说： cyclin D1和p27都是胞核蛋白，常规的裂解液加蛋白酶抑制剂提取不出来，需要买专门的核蛋白提取试剂盒才能提取
我现在有两个问题：
1、查了很多相关的文献，都没有明确说明cyclin D1和p27是胞浆还是胞核蛋白？所以到现在我还是对两者的定位表达不清楚。
2、如果是胞核蛋白，一定要用专门的核蛋白提取试剂盒吗？常规的提取法也可以不？
实验进行中，受此问题困扰很着急，还请各位高手及早指点迷津，感谢万分！
顶部
阿k[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76208
精华 0
积分 262
帖子 222
信誉分 101
可用分 1886
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
2

发表于 2014-3-8 09:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过p27,用常规的没问题啊
顶部
tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
3

发表于 2014-3-8 09:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过cyclin D1, 也是用的常规提蛋白的方法，没有问题。建议你买cell signaling的cyclin D1抗体，跑出来的条带非常好。我曾经用过Santa Cruz的，带子就差很多。另外，cyclin D1的分子量是36，相对较小，你要用浓度大一些的胶。我一般用12％－15％的。
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
4

发表于 2014-3-8 09:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有哪位战友用过Santa Cruz的cyclin E，我用的是RIPA buffer，也是没有出现条带，难道正如楼上所讲，由于裂解液的问题？
顶部
any333[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 76446
精华 1
积分 1533
帖子 2542
信誉分 102
可用分 13711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
5

发表于 2014-3-8 09:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的santa的cyclinE也没有出条带，但是我老板在加拿大用此抗体做的非常成功。
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
6

发表于 2014-3-8 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有人说santa cruz的抗体不稳定,可能一批是好的,换了一批就不一定了,好像跟撞大运一样.那楼上站友"等等",你的抗体最后换了没有?
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
7

发表于 2014-3-8 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tangxin_80 于 2014-3-8 09:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我做过cyclin D1, 也是用的常规提蛋白的方法，没有问题。建议你买cell signaling的cyclin D1抗体，跑出来的条带非常好。我曾经用过Santa Cruz的，带子就差很多。另外，cyclin D1的分子量是36，相对较小，你要用浓度大一些的胶。 ...

能告诉一下,你是否做了phospho-cyclin D1,稀释比例是多少,条带如何吗?
顶部
tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
8

发表于 2014-3-8 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yes4 于 2014-3-8 09:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


能告诉一下,你是否做了phospho-cyclin D1,稀释比例是多少,条带如何吗?

我没做过phospho-cyclin D1，只测过cyclin D1的表达量。按1：1000，用4％BSA稀释，二抗也是用4％BSA稀释，1：2000。条带很好。
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
9

发表于 2014-3-8 09:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做了Cyclin E (santa cruz ,1:100稀释)仍然没有条带,咨询了一下别人说是要做细胞周期阻断,做过的战友是否能够给些指点.
顶部