小中大【求助】marker条带缺，曝光结果怪
刚开始做western blot，走过两遍完整的过程，可是结果很奇怪，请各位老师指导分析。
我的目的蛋白分子量 42kd ，抗体都是santa cruz的，一抗goat 抗 rat 多克隆，二抗驴抗羊-hrp, 蛋白marker是fermentas sm0671 可视的那种，ecl 发光剂 不知道牌子的和millipore都有用。分离胶是12％的，照着分子克隆的
我跑的两次，首先电泳时marker条带比正常的少，尤其似乎缺了我要看的40kd左右的条带，而且条带很糊，越跑越谈。
下面是膜上的marker条带，基本和胶上是对应的，浓度也差不多。和说明书上应该出来的条带差别很大，缺很多条带，胶上主要缺56kd和43kd的条带，请问这是怎么回事？
小的那块膜是我第一次做，用的是师兄流下来的试剂，大的一张改用同学的试剂（除了30％双丙和10％sds），结果也还是一样。
问题：1。marker缺条带，而且很糊，越跑越淡，请问可能有哪些影响因素？
2。又或者是不是marker有问题？
原来怀疑tris－cl PH的问题，测了一下，果然不大准，第二次就换了同学在用的，结果还是这样。ap 是现配的，temed 新买的，胶凝的很不错。30％gel有几个月了，一直放在4冰箱里，可能这个失效了？电泳缓冲液是买的10×的贮存液，基本是现配现用的。跑胶30ma恒流。marker是新买的，和同学一人一支，他跑8％的胶，分子量100多的，跑的时候和我不一样，看不了条带。
