【求助】蛋白检测

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标题:【求助】蛋白检测

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位老师，我是新手！我今天做wb，用转膜后用丽春红染色条带很清晰，但没有检测到我的蛋白，我用免疫组化检测到我的蛋白有表达，而且很好。转膜后我用卡马斯亮兰染色见到很多蛋白没转到膜上，不知道有没有影响？不知道怎么暴不出了条带来？

49888[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

加长转膜时间，最好将蛋白都转到膜上，再做WB时才会有好效果

bring[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

WB没检测到蛋白？
把你的实验步骤贴出来啊。

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

哦，小弟分离胶为10%，浓缩胶为4%，60伏跑浓缩胶，100伏跑浓缩胶。转膜为1毫安/平方厘米（按NC膜面积算）。转了两小时。转膜后我用卡马斯亮兰染色见到很多蛋白没转到膜上，不知道有没有影响？不知道怎么暴不出了条带来？谢谢

H2O[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转膜后，胶上留的蛋白比目的蛋白分子量小的话，那你目的蛋白一定也没转过去；若大的话可能不会影响结果的，但最好还是尽量转干净。

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可小弟的目的蛋白是54kd的应该很容易转到膜上的

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天我转膜用了三小时可是又没爆出条带来。很郁闷。显影定影液应该没问题我师兄做别的蛋白就能出来。对了我的目的蛋白是核内表达，我用的是全细胞蛋白提取液，不知道行不？谢谢

尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天我转膜了两小时，b-actin做出来了。条带很好

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠，有个问题请教：组织在－20度保存几个小时后，才置于－80度储存，还能做WB和PCR吗？谢谢！