【求助】等电聚焦时靠近正极端出现异常

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标题:【求助】等电聚焦时靠近正极端出现异常

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发表于 2014-3-10 21:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求教各位：
等电聚焦结束后在靠近正极端出现似月牙般白色的，每根胶条大约2-3，宽度不等，最窄宽度似溴酚兰迁移时的宽度，宽的有2cm左右。用的是24cm，pH3-10的胶条。仪器：GE公司Ettan IPGphor Ⅲ等电聚焦系统，聚焦程序：1、step 200v 0:30h 2、step 500v 0:30h
3、gredient 1000v 2:30h 4、gradient 10000v 4h 5、step 10000v 7h

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这是轻微烧胶条的表现，主要是除盐不够。
你在10000V这步的实际电压和电流值分别是多少？
同时，如果你的正极端胶条变厚，那就不太好了，需要重新除盐。如果仅胶条变白，胶的厚度正常，那末可以染色看看。然后在下次做时，将低电压除盐的步骤增加，时间加长，比如增加100V 1h，200V 1h，500V 1h。
祝实验顺利！

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发表于 2014-3-10 21:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您好，feima+：
我做了两次24cm胶条的等电聚焦，每次电压均能正常升到10000V，电流一次为25uA，另外一次为36uA。现把图片发上去（考染显色），请各位老师、师兄师姐提出改进意见。

附件

2014-3-10 21:30

64530410.snap.jpg (16.02 KB)

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的图右侧是碱性端吗？似乎没什么点啊！
碱性端的胶条有变厚的现象么？还是建议要除盐！

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发表于 2014-3-10 21:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢您，feima+。左侧是酸性端，右侧是碱性端，材料是苹果叶片，蛋白质点基本集中在4-7的范围内。等电聚焦时碱性端的胶条没出现变厚的现象。如果有盐分干扰的话，电压能够正常升到10000v吗？

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1, 有盐分干扰时，电压也能升到10000V。我有几次做18cm的胶条，电压达到了8000V，此时电流也不大，大约20uA/strip。但当把胶条从槽里取出是，发现和烧焦的白色痕迹，严重时，酸性和碱性端都会变厚。
还有一个判断盐是否高的方法是看水化时的电流。一般来说，在50V，12h的水化开始时，如果电流小于10uA/strip，说明盐浓度不高，如达到30uA/strip，就要除盐了。不知LZ的水化电流有多大？
2．另外，建议LZ选择pH4-7，18cm strip试试，分离的效果可能更好！
祝实验顺利！

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发表于 2014-3-10 21:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢您指点，我一般是被动水化，没有主动水化。