【求助】蛋白样品的保存

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标题:【求助】蛋白样品的保存

xevin[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问，为什么蛋白样品变性保存之后每次取用时还要再次变性，并且要再次离心，这样除去的是什么东西。如果不做这步，会有什么不良影响，谢谢赐教！

wiwi[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们都是蛋白-20保存，之前不变性，每次取出后室温孵化，离心，变性后加样。

xevin[使用道具]
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发表于 2014-3-10 21:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

但是我一般都是把蛋白变性后保存的。这样保存时间比较长一些。但看到有人说使用前要再次变性、再次离心，这是为什么呢？不理解！请人指教下。

xevin[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我问的这个问题是太弱了吗，怎么都没有人回答一下我呢。可是我是真的不明白啊

sr9971[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xevin 于 2014-3-10 22:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我问的这个问题是太弱了吗，怎么都没有人回答一下我呢。可是我是真的不明白啊

是啊，人家都不知道你做的什么试验？什么目的？

misswu61[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上意思可能是说将蛋白变性后存放-20度后，每次WB。取出蛋白使用时候是不是要再次煮沸变性，然后上样。我觉得蛋白样品煮沸变性后，分装使用。每次只拿出单次的用量。对于离心的问题，我觉得应该是组织的蛋白应该每次上样前离心使用，而细胞的蛋白样品则不需要。不知道大家是怎么认为的?

ero11[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

正确的答案没有人给出吗？

hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也不明白，不过我知道我们实验室蛋白保存的一些知识，我们把蛋白透析完之后，先要超高速离心，然后把变了性的，活性不好的蛋白形成的聚集体给它离掉，之后放入液氮中保存，当使用的时侯，直接从液氮中取出，然后再次在超高速离心机中离心，同样是为了除去因为存储过程中有些蛋白会变性，形成一些聚集体，之后才把那些蛋白用来做实验的.我不明白楼主说要在储存之前把蛋白变性，为什么要把蛋白变性呢？变性了的蛋白还能用来做后续实验吗？难道你们的蛋白做后绪实验之前还要将之复性吗？那那个蛋白在储存时变性有什么好处呢？

txwuyan[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不明白为什么要变性保存

xevin[使用道具]
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发表于 2014-3-10 22:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做western blot的啊。都是用变性蛋白跑胶啊。