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标题:[未解决]峰高和峰面积降低,同一个样品的重复性不好?

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mingdongmmw[使用道具]
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峰高和峰面积降低,同一个样品的重复性不好?

最近在使用HPLC时,遇到一个情况:

在进样时,头两个样品出现的峰的面积和峰高均与以往的情况类似,属正常;但到了第三个样品时,峰高和峰面积都降低,为以往的1/3~1/4左右,重打前面两个结果正常的样品,此时峰面积和峰高也变成正常时的1/3~1/4;标样的情况也一样,均为正常时的1/3~1/4。所有峰面积和峰高减少的谱图中,目标物质和杂质的出峰时间均与正常情况一致。而且同一个样品的重复性不好。

对管路、泵头等进行过彻底的清洗后,结果一样;重新配制流动相后,结果也一样。
不知道这种情况是什么原因引起的?请各位指教!

ps:
流动相:甲醇:0.1mol/L磷酸二氢钾(磷酸调pH=3)=10:90。(流动相的盐浓度可能比较高,但已经用了很久了,情况一直正常,就只有这次出问题了)
检测样品为植物的提取液,经过离心和微滤膜过滤,进样量为5微升,进样针控制量。
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naren4545[使用道具]
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检查一下你的手动进样阀吧!
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renmr03[使用道具]
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看看哪里漏水了,很可能进的样在哪里漏掉了一部分,进样阀,柱子都有可能漏
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mingdongmmw[使用道具]
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柱子应该没漏,检查过多次
我也怀疑过进样阀漏,表面看不出来,但又不知道如何判断
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renmr03[使用道具]
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用滤纸,撕一小块,到处缝隙里试一试,看滤纸湿不湿

检查泵
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mingdongmmw[使用道具]
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泵也检查过,经过清洗,流速还是比较稳的

还有我也不太明白,这个泵是如何影响的
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woaifou[使用道具]
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流通池呢?看看进样阀有没有液体流出,盐浓度高进样阀密封圈很有可能磨损
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PURPOSE人生[使用道具]
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8
 
楼主是连续近标样试验了吗?如果是连续进同一瓶标样出现此问题,那么是仪器可能有问题。如果同一瓶标样连续进样没有这种情况,出峰正常。建议楼主看看样品前处理过程中是否存在问题。如果想不起来就重新处理一瓶样品。
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mingdongmmw[使用道具]
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9
 
我对同一瓶标样进行过多次进样,结果差不多,重新配标样也试过,结果也一样,同一检测样品也进行过多次检测,除了头两个样品的第一次进样是正常的,其他都是不正常的。
所以,我怀疑是仪器或者柱子的问题,具体问题又找不到,很是迷茫。
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maomi520[使用道具]
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感觉是硬件的问题 在整个测定系统中有定量的损失
做气相的时候出现过类似的问题 排查了很多因素 最后发现是进样针堵了
不知道有帮助吗
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