小中大峰高和峰面积降低,同一个样品的重复性不好?
最近在使用HPLC时,遇到一个情况:
在进样时,头两个样品出现的峰的面积和峰高均与以往的情况类似,属正常;但到了第三个样品时,峰高和峰面积都降低,为以往的1/3~1/4左右,重打前面两个结果正常的样品,此时峰面积和峰高也变成正常时的1/3~1/4;标样的情况也一样,均为正常时的1/3~1/4。所有峰面积和峰高减少的谱图中,目标物质和杂质的出峰时间均与正常情况一致。而且同一个样品的重复性不好。
对管路、泵头等进行过彻底的清洗后,结果一样;重新配制流动相后,结果也一样。
不知道这种情况是什么原因引起的?请各位指教!
ps:
流动相:甲醇:0.1mol/L磷酸二氢钾(磷酸调pH=3)=10:90。(流动相的盐浓度可能比较高,但已经用了很久了,情况一直正常,就只有这次出问题了)
检测样品为植物的提取液,经过离心和微滤膜过滤,进样量为5微升,进样针控制量。