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标题:【求助】WB实验中膜的正反面

王小主[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】WB实验中膜的正反面

在Western Blot实验中，转膜后，PVDF或者NC膜的正面应该就是靠正极那面吧？也就是靠胶的那面是反面？在接下来的实验操作，如洗膜、封闭、加一抗和二抗等，操作方面都有什么讲究呢？是不是都用反贴法？来自一个新手的疑问，谢谢大家的指点！
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般pvdf膜的正面是挨着胶的那面吧~如果有两张膜同时做封闭的话，注意把挨着胶的那边背靠背的放置，也就是最好不把两个膜的正面面对面的放置。
也不知道说清楚没有~
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们在做这个的时候都是靠胶的那面朝上
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也没有什么严格规定，我 建议每次封闭，加一抗、二抗都
只加一张膜，膜多了会互相有点影响的，而且封闭会不好。
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王小主[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为靠胶的那面是反面。在ECL发光的时候就要讲究正反面了，反贴法孵了A&B混合液后，再放在暗盒的保鲜膜里就是正面朝上。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得靠胶的那面是正面。一抗二抗都是上在这一面上。
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发表于 2014-3-13 20:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有那么多“我觉得”。
转膜就是使用电力，将胶内的蛋白拉出来，遇到膜时吸附到膜上。所以，蛋白主要在靠胶这面，也就是这时正面。
当然这类膜都是有孔的，孔径有0.45、0.22、0.1um等等。而蛋白的大小远小于它的孔径，所以蛋白也是有可能从孔穿到对面的。而抗体、BSA、ECL等小分子都可以透过孔从这面到另一面的。
所以我觉得正反面不是很重要，我刚开始做的时候根本不注意这回事，也没有因为这个原因导致试验失败的。
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用半干转膜，没注意过正反面，影响不大
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我管靠胶的那面叫“蛋白面”，因为用丽春红染时，这一面的蛋白条带明显比另一面清晰。封闭、孵抗体和显影，这一面都向上。
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txwuyan[使用道具]
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发表于 2014-3-13 20:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Thermo的工程师来我们实验室做Western讲座时，我专门问了他膜正反面的问题。他说不用分正反面。我自己做Western也从来不分正反面，没出过什么问题。
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