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标题:【求助】MALDI-TOF-MS

再回首tv[使用道具]
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发表于 2014-3-13 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】MALDI-TOF-MS


最近做质谱遇见了奇怪的现象：考染时有的点能够打出结果，但银染的点打出的全是一样的峰图，峰值是：810，923，1036，1149，1262...........出现的全是相差113的有规律的斜峰。考染有的点打出的结果也和银染是一样的。
怀疑是胶有问题但从另外实验室拿来的样品也作出同样的结果。请分析一下我的是有什么污染吗？或者是其他什么原因。谢谢！
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-3-13 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

It might be from your gel polymer.
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-3-13 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

象这种峰的出现最有可能来源:
1)使用国产Ep管,Ep管是聚合物组成(我们这边一个师兄,将国产Ep管用MilliQ水超声后进行MALDI-TOF-MS发现的就是这样的峰),所以MS强烈推荐不要使用国产货;
2)胶粒酶解时后，提肽时,上清液提取不干净,将胶成分也提取了(大多数由于胶粒过小,tip头过大造成,可以将提取的液体离心后再进行冻干来避免)
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 小中大

你的胶固定的怎么样？中间步骤有没有用特殊实际处理？你的银染试剂盒和MALDI匹配吗？
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-3-13 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“将国产Ep管用MilliQ水超声后进行MALDI-TOF-MS发现的就是这样的峰”！太夸张了吧？！但MALDI前样品要超生处理吗？zebrafishtom的第二个建议值得一试。
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-3-13 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一点也不夸张,这个是事实.
你将细胞提取蛋白的时候这个时候如果已经用超声提取蛋白了，这个时候就已经引入polymer了.
还有,我们这边提肽的时候都进行水浴超声(没裂解超强)处理1min,以利肽段提取.
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发表于 2014-3-13 21:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶固定时没有特殊的处理，银染方法也是匹配的，因为我们实验室做质谱已经有三年，以前都能打出比较好的峰图，就是最近出现这样的问题。我们的Ep管是用甲醇润洗后再用milli-Q水洗的。
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 小中大

最近做质谱出现了很多的问题：银染脱色我们实验室用的是25mM的铁氰化钾和100mM硫代硫酸钠（使用前1：1混合），有的时候脱色效果较好，几分钟后能变成和脱色液一样的黄色；但有时加入脱色液后胶马上变为绿色，无法脱掉颜色（怀疑是铁离子被还原）但找不到什么原因引起的。希望大家指点指点，万分感谢！
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