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标题:【求助】信号肽是否需要切除?

hulu呼噜[使用道具]
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【求助】信号肽是否需要切除?


我想原核表达一个沙门氏杆菌的一个分泌基因,在DE3中表达,是否需要把这个基因的信号肽去除呢?
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u234[使用道具]
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1. 如果你想细胞内表达,当然去掉信号肽会更稳妥。
2. 沙门氏杆菌和原核表达宿主亲缘关系接近,其蛋白信号肽也可能会在该表达宿主中有功能而将目的蛋白分泌导胞外,这样也可以从细菌培养液中纯化。
3. 当然还要看你下游的应用是否会受信号肽的影响。
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3648755[使用道具]
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二楼第2个问题不是很正确,原核的分泌表达不可能分泌到细胞外,那是真核,原核只分泌到周质空间,如果信号肽有作用的话分泌的过程中信号肽是会被信号肽酶切除的。
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hulu呼噜[使用道具]
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不做什么信号肽作用,就是简单表达个蛋白,然后免疫动物制备血清,做个western-blot.
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yueban-1147[使用道具]
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既然楼主只是要做个WB,信号肽是没必要保留的,这个信号肽在DE3中不知是不是能够被识别。
其实即便是能够被识别,目的蛋白在分泌到细胞周质的时候这段序列还是要被切掉的,详情楼主可以参考pET22表达载体,这个载体上就有一段信号肽,表达出的蛋白最终是不含信号肽的。
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hulu呼噜[使用道具]
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回复 #5 yueban-1147 的帖子

也就是说,设计引物的时候含不含 表达信号肽那部分 核苷酸序列都无所谓了,是么?
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u234[使用道具]
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yueban的理解可能片面了,原核细胞中,周质空间的信号肽可以把内膜里的蛋白转至内膜外,至于该蛋白是呆在周质空间,还是整合到外膜上,或是外膜外(这里指革兰氏阴性菌),要视具体蛋白而定。“原核的分泌表达不可能分泌到细胞外”值得商榷,一些胞外核酸酶或蛋白酶是分泌到“胞外”的,即外膜以外(这里指革兰氏阴性菌)。真核细胞据我所知绝大部分只有一层细胞膜,当然是分泌到“胞外”了。
说了这么多,再回到楼主的问题,如果只是表达蛋白用来做抗体,可以不用信号肽,如果该蛋白很大不好表达也可以考虑表达部分序列,甚至可以人工合成多肽免疫动物制备血清。
上面所说的不一定正确,全面,仅供参考,现在生物学中的很多东西都需要深入探讨,欢迎讨论。
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yueban-1147[使用道具]
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回复 #7 u234 的帖子

谢谢你的指正,我确实不知道这些,您那有相关原核分泌表达的文献吗?我想多看看,了解了解,我们做原核表达就分泌到周质空间,也就没多关注!先谢谢你!
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mimili_901[使用道具]
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