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我一开始是怀疑，穿出中的目的蛋白可能与结合在柱子上的并非一种物质，等电点可能并非9.6，所以我将穿出上DEAE看是不是能结合在DEAE上。但现在HPLC测定它们在同一个位置上。
将结合上在阳离子柱上的目的蛋白纯化所得的纯品，等电聚焦测定其pI点确实在9.6左右。发酵液上清在上阳离子柱之前脱盐处理过了，电导应该没有问题。缓冲体系会有影响吗？如
果是缓冲液的问题，为什么目的蛋白会一部分结合阳离子柱一部分不结合呢？
将阳离子穿出的液过DEAE柱看能否挂柱,这样做有意义么?如果穿出，那很正常,因为目的蛋白PI - pH=2.4。如果能挂柱，只能证明穿出蛋白PI<pH。对过离子交换，疏水层析，亲和层析等吸附与解吸过程的分离方法而言，穿出少量目的蛋白也在正常情况，如果想使目的蛋白尽可能挂在柱上其他因素也很重要，比如流速，温度等等。
另外， 在进行离子交换时，如果缓冲离子所带电荷与离子交换剂上的功能集团相反，将参与离子交换过程，并可能对局部pH产生影响，因此尽可能采用与功能基团带同种电荷缓冲离子，即：使用阴离子交换剂时选择带正电荷的缓冲液；使用阳离子交换时选择负电荷缓冲离子。
[ 本帖最后由 kent 于 2014-3-15 10:25 编辑 ]
