小中大你好。我还真是没有想明白发光时候怎么会发出ep手套的花纹！！确实有意思。改天我就用EP手套试一试，亲身感受一下。
国产的抗体的稀释倍数的确大部分是1：100-1：400，这个我清楚，即使是进口的也是说500-1000的稀释。我做一抗全部都是中山公司进口分装的（绝无广告之嫌），1：4000，5-7个泳道（一般蛋白都是分离胶跑3 cm停止）都是用4 ml封闭液，加1 ul抗体。为了节约抗体，我一般上样都是40 ug左右，保证有足够的蛋白用于试验。将PVDF膜封闭后，我会现在室温下轻摇1 h，然后放入4度冰箱中过夜，第二天取出后再轻摇0.5 h，然后洗膜。为此，我做一次WB用2天。上午跑胶，转膜，中午开始封闭2-3 h，然后孵育1抗，过夜。以我的经历，要想有效节约抗体，首先要上样蛋白要足够，其次转膜要充分，还有用较高稀释度的抗体时候一定要保证抗体充分与抗原结合，最后，选用好的ECL kit，我一直用的是milliompore的ECL，质量没话说。我们实验室的WB装置从来就没有歇过，有同事疯狂节约，1抗稀释度1：6000（9个泳道，6ml封闭液加1ul抗体），我“骂”他有病，这样做下去抗体公司全要关门。可他就是用1：6000做出来了很多抗体的WB，我还真是佩服。所以说，要想节约抗体，不是那一步的问题，而是整个WB的操作都要规范。
我用的封口膜是从鼎国公司购买的，不贵的。这种膜比较厚，对封口有好处。
