蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】是不是丽春红染不上色说明蛋白一定没转上膜

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】是不是丽春红染不上色说明蛋白一定没转上膜

白白的[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
1

发表于 2014-3-17 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】是不是丽春红染不上色说明蛋白一定没转上膜


今天又转了一次，依然是老问题，丽春红染仍然没有条带，marker转的很好。跑了两块胶，其中一块做了考马斯亮蓝染色，有很明显的条带。转过后的膜用干燥透视法（用20%的甲醇湿润后放在灯箱上观察有没有条带）发现有条带，但丽春红就是染不上色，不知道什么原因，请战友指点，谢谢了。
我考虑蛋白应该是转上去了，但为什么丽春红染不上色，丽春红染色不是挺敏感的吗。
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
2

发表于 2014-3-17 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 白白的 的帖子

丽春红不敏感，灵敏度不如考染
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
3

发表于 2014-3-17 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

丽春红可以染胶吗？
顶部
kuohao17[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77299
精华 0
积分 559
帖子 716
信誉分 101
可用分 4453
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
4

发表于 2014-3-17 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么会这样,我染色都可以看见膜上有蛋白啊,是不是你染色时间短,你染多长时间.我一般染15到20分钟.
顶部
bring[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74282
精华 0
积分 597
帖子 914
信誉分 100
可用分 5326
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
5

发表于 2014-3-17 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的丽春红染液配方是什么?
顶部
白白的[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
6

发表于 2014-3-17 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我都染半个小时已上啊，我的丽春红是买公司的浓缩试剂，我买回来只要稀释就可以用了。做了3次了，都是这样的，还真不知道什么原因。
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
7

发表于 2014-3-17 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

丽春红染色灵敏度是250ng
我试过200ng一般能看到
100ng基本上都看不到
你蛋白量少了肯定看不到的
顶部
白白的[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
8

发表于 2014-3-17 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你讲的250ng，200ng是指什么的，是指加的上样量的总蛋白吗，我的上样量的总蛋白应该在300ng以上啊。还是说指的是每条条带的量，如果是的话，那该怎么计算？
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
9

发表于 2014-3-17 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然是指每条条带的量了
比如说你拿BSA稀释后上100，200，500ng/lane作为对照，看看丽春红是否染上
对于你的目的蛋白，如果考染可以看到，就和marker比较一下，可以估算一下大概有多少量，好多公司的protein marker在标准上样量下，每条带大概有多少蛋白会标明的
比如biorad的有的marker，最细的条带大概有150ng
顶部
7437654[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107983
精华 0
积分 307
帖子 313
信誉分 100
可用分 2366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
10

发表于 2014-3-17 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
丽春红不用染那么久，我一般滴一毫升滴到膜上，等5分钟用TBST冲掉染液就可以看见蛋白带了。
顶部
 11  1/2 12››