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标题:【求助】小分子蛋白的WB需要注意什么？胶的浓度多少为宜?

idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】小分子蛋白的WB需要注意什么？胶的浓度多少为宜?


请教各位,有谁做过小分子蛋白的WB吗?我马上要做分子量为8KD蛋白的WB，
请问做小分子蛋白的WB有什么需要注意的，实验条件有哪些需要变化的?请知道的同志赐教!
非常感谢!
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youyou99[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

书上都说：SDS-PAGE线性分离范围
丙烯酰胺浓度（％） 线性分离范围(KD)
15 12~43
10 16~68
7.5 36~94
5.0 57~212
不好分开呢。用预染MARKER
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议采用大于15％的分离胶，最好用梯度胶。另外PVDF膜的孔径要选用0.22uM的，不要用0.45uM的。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

国外文献建议用16.5%的
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，我想请教下15%的分离胶怎么配啊？还有梯度胶怎么配？非常感谢！
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪位高手有15%和16.5%分离胶的配方吗?谢谢！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶总体积ml 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.0
30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位啊，哪位高手有16.5%分离胶的配方嘛？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你就用15％试试，实验这玩意不好说，说不定就行的
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-3-17 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凝胶浓度可以自己算出来的
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