【求助】人的干扰素-γ 含有二硫键吗

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标题:【求助】人的干扰素-γ 含有二硫键吗

wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教一下：人的干扰素-γ 含有二硫键吗，二硫键的形成一定要有cys的参与吗？

小野花[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有,肯定需要cys,不然就不能形成二硫键.你也在做干扰素吗?

wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可是我见过他们作分子的发过来的氨基酸序列，里面没有cys啊，是不是干扰素-γ 里面没有二硫键啊？

gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

干扰素-γ 本身没有cys，但是在实验中确实存在部分二聚体，但是即使在还原条件下还是没有消失，原因不明，其实好多情况下，SDS-PAGE的现象没法解释

wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那么是不是其他氨基酸结合形成的，这方面的知识我知道的很少，希望您能指教

gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

具体的原因我也没有弄明白，但是蛋白通过高分辨的SUPERDEX G75也没有去掉二具体位置的蛋白。暂时解释不清楚。

ii077345[使用道具]
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发表于 2014-3-17 22:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

IFN-gamma与-alpha, -beta不同，后两者含cys，形成分子内-S-S-，而且与活性关系密切，
IFN-gamma以二聚体形式存在才具活性，不含cys，两个单体反相相互以非共价键的形式结合，三维结构上就像个球，形成的alpha螺旋具好些疏水区

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发表于 2014-3-17 22:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

问题是SDS-PAGE电泳条件下还是存在二聚体，单纯用非共价二硫键来解释好象比较难理解和接受！
我以前还碰到蛋白有二硫键，但是在还原条件下仍然有很多的二具体，好象也难解释，而且是在变性条件下。

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发表于 2014-3-17 22:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 gmjghh 于 2014-3-17 22:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
问题是SDS-PAGE电泳条件下还是存在二聚体，单纯用非共价二硫键来解释好象比较难理解和接受！
我以前还碰到蛋白有二硫键，但是在还原条件下仍然有很多的二具体，好象也难解释，而且是在变性条件下。 ...

有时还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子。
处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。

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发表于 2014-3-17 22:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 daod 于 2014-3-17 22:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有时还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子。
处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原 ...

首先你要确定，两倍分子量的地方是不是二聚体？！
有可能是非特异的条带呢，不能先入为主地想它是二聚体，
因为我有个师兄作一个蛋白，用单抗，出来就是42KD位置，而他的蛋白石21KD的，那就觉得是二聚体，但是这个蛋白本身就是个单亚基的，哪来的二聚体？
一般情况下，煮沸及SDS是会破坏非共价键的，如果确实是二聚体的话，那就考虑下加入硫脲或尿素试试看，或改变下缓冲液的离子浓度及PH值。
关于还原条件下仍存在二硫键形成的二聚体，是经常存在这样的情况，和二硫键的数目以及DTT浓度有关，可考虑楼上战友的意见，或做个烷基化处理，防止蛋白再次形成二硫键。