【求助】SDS-PAGE电泳低分子量Marker怎么样才能...

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标题:【求助】SDS-PAGE电泳低分子量Marker怎么样才能...

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-18 10:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家好！我想再请教个问题，最近一直在做蛋白表达，所以也跑了不少SDS-PAGE电泳，但是每次Marker都跑的不漂亮，其实我也不要求有多漂亮，只要能跑出说明书（联系地址为：上海市岳阳路320号，生化大楼237室）上的6条带就行。我也问过一些做蛋白的朋友，大部分人也都是跑出5条带，而我大多数情况只能跑出4条带，不知道怎么回事。我的电泳条件是这样的：12％的分离胶，5％的浓缩胶，电压是90v5min，然后调到180v，直到指示剂跑至胶低。请问大家是怎么跑的啊？咋样才能跑出6条带呢？谢谢啊！

PINK[使用道具]
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发表于 2014-3-18 10:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

分离胶长一点，能用恒流最好。用恒压开始时电压为70v，直到条带跑至分离胶时再改用100v，一般都能跑出6～7条带。（所用marker不同公司）试试看吧，就是时间比较长。

greenbee[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 feima+ 于 2014-3-18 10:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

大家好！我想再请教个问题，最近一直在做蛋白表达，所以也跑了不少SDS-PAGE电泳，但是每次Marker都跑的不漂亮，其实我也不要求有多漂亮，只要能跑出说明书（联系地址为：上海市岳阳路320号，生化大楼237室）上的6条带就行。我也问过一些 ...

不知道你的MARKER分子量跨度是多少？用你的跑胶系统有没跑过别的MARKER？首先保证MARKER质量问题，在这个前提下，跑胶电压时间都不是主要问题，除非你的分离胶只倒了一半高度或者是漏了一半，这些都排除以后，说主要问题，12.6%的分离胶完全可以分离15-150KD的蛋白，所以在这个跨度内的MARKER条带肯定都能跑出来，倘若不然，就是你的凝胶问题，准确说是聚丙烯酰胺的质量问题，纯度不好，建议换好点的至少应该是进口分装！甚至我们也遇到进口分装有伪劣的！

ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

marker问题吧，换一只44。

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的低分子量蛋白Marker是14,400-97400道尔顿，分别是97、66、43、31、20和14kd的。以前跑出过6条带，应该不是Marker本身的问题。我配制的SDS胶的分离胶是整个胶的2/3或是1/4，应该也不是分离胶太小的原因吧。

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议用低电压跑，直接用80v跑到底。

PINK[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的低分子量蛋白Marker是14,400-97400道尔顿，分别是97、66、43、31、20和14kd的。以前跑出过6条带，应该不是Marker本身的问题。我配制的SDS胶的分离胶是整个胶的2/3或是1/4，应该也不是分离胶太小的原因吧。

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聚丙烯酰胺的问题，建议重新买质量好的！

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换个公司的吧,国产的也有很多不错的,性价比非常好,南京艾基生物的protein ladder,及预染的MARKER都不错.

feima+[使用道具]
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发表于 2014-3-18 11:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

艾基的protein ladder: 100,80,50,40,30,20,15kDa