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Resurrecting Abandoned Proteins with Pure Water: CD and NMR Studies
of Protein Fragments Solubilized in Salt-Free Water
Biophys J. 2006 Dec 1;91(11):4201-9. Epub 2006 Sep 15
再一次重复同一篇文章，比较适用于完全不可能溶解的蛋白，建议有空的时候可以读读。
对于LZ的蛋白有几点看法。
1。 既然有5个2硫键，那么0.1%β巯基乙醇 （15uM）是远远不够的，通常认为100mM的DTT才能完全打破2硫键，如果是β巯基乙醇，怎么也要2％吧。
2。 复性液 GSSG：GSH＝2：5，这个比例需要再测量，建议梯度，从1:5 到1:20
3。 蛋白的复性浓度要很低，通常为1ml的蛋白加到100的复性液。
4。 用RP-HPLC作为复性的检测和分离的手段，通常需要3个小时到3天。
5。 蛋白是case by case，因此复性不了很正常，如果上述方法不行，建议找其他表达系统。
6。 5个2硫键是多了一点，见过3个成功的。
7。尿素里的杂质据说还是有一定影响的，我们通常用sigma的。
最后补充一点，蛋白复性以后，如果技术过关，还是可以得到具有正常结构的蛋白，在蛋白结构领域里有很多这样的例子。
