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标题:【求助】帮忙分析双向电泳Mark条带

nn255[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】帮忙分析双向电泳Mark条带


为摸索Mark最佳浓度，跳过第一向，直接做SDS－PAGE。凝胶浓度12.5％
其中1、2、3、4是同一种Mark a，分子量（k Da）为97.0；66.0；45.0；30.0； 20.1和14.4。5、6是另一种Mark b，分子量（k Da）为16.9；14.4；10.7；8.16；6.21和2.51。
请各位大侠帮忙解答一下：
1、Mark a只有六种蛋白，为什么却跑出了8条带？
2、Mark b为什么只跑出了3条带，是不是凝胶浓度太低了，最佳浓度是多少
3、分析一下这块胶质量如何，哪些地方需要注意！


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2014-3-18 21:35
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

mark a 的原因我没有见过，mark b很可能是胶的浓度低了，你不妨试试15％－20％的胶浓度。
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发表于 2014-3-18 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

marker a可能有些搞错了
两点原因：1）。8条带肯定都是maker带
2）。如果照你所标，66KD和45KD在12.5%的胶上不会跑那么上面的
maker b么，分子量太小了，是要跑出去的
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充：
电泳参数如下：P1 2W 45min
P2 17W 3 h
再问一个：
4、mark a和mark b中都有分子量14.4 k Da的蛋白（但蛋白种类不同），但为什么电泳的距离明显有差别？
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

急求第四个问题！！！！
4、mark a和mark b中都有分子量14.4 k Da的蛋白（但蛋白种类不同），但为什么电泳的距离明显有差别？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题，不同的marker差别是有的，
就象我从同一个公司买的同一货号的，bovine serum albumin 的分子量也不同，有的写９０KD,有的写８５ＫＤ　
更何况是不同的蛋白，
marker只是大致估计下你目的蛋白的分子量，不可能很精确的
尤其是藕联了染料的预染marker，不过你这个好象不是预染marker
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker使用前最好先进行变性处理.否则marker会有杂带出现.
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zhihui小新[使用道具]
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发表于 2014-3-18 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白变性!
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发表于 2014-3-18 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好与你的目的蛋白相匹配的凝胶浓度 ，
目的蛋白的胶浓度确定,在觉定MARKER， 可能比较好哦。
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