液相色谱

Cliquid®新生儿遗传代谢病研究方法V1.1
LC/MS/MS是研究代谢异常的主要工具,氨基酸和酰基肉碱类化合物的同时测定可以提供超过40个代谢异常的相关信息,如:PKU苯丙酮酸尿症和长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCAD)。AB SCIEX 新生儿遗传代谢病研究LC/MS/MS iMethodTM是基于流动-注射的分析方法,该法在AB SCIEX 3200和 4000系列质谱上都得到了验证。
该法通过对干血点样本直接进行氨基酸和酰基肉碱的筛查分析。方法样品前处理、工作流程简单、快捷。试验结果与衍生化法相符。同样采用Chromsystems干血片氨基酸和酰基肉碱分析方法包(但该 iMethodTM方法包内不含该套试剂包),该方法包含样品盘,提取和衍生试剂,缓冲液,内标物,校正物。干血点样品直接提取,然后进上清夜进行质谱检测。
结论
方法采用一系列的血点质控样本进行方法验证。空白、低浓度、高浓度3个浓度的质控样品,每个浓度的质控样品平行处理5次,每个样品重复进样3次。这里列出的是低浓度目标分析物%CV值 (n=15)。
表1. 目标分析物的精密度数据
目标化合物         中文名称         Level1 对照 (平均浓度 μmol/L)         %CV         Level1 对照 (平均浓度 μmol/L)         %CV
                                       
Alanine         丙胺酸         362.2        5.75        633.7        4.1
                                       
Alanine(by MRM)         丙胺酸         340.4        5.26        606.6        3.32
                                       
Arginine         精氨酸         18.7        1.8        93.6        5.24
                                       
Aspartic acid         天冬氨酸         142        7.8        265.3        4.82
                                       
Citrulline         瓜氨酸         58        6.12        218.2        3.87
                                       
Glutamic acid         谷氨酸         432.5        6.07        798.6        4.39
                                       
Glycine         氨基乙酸         391.1        5.4        1125.8        3.16
                                       
Leucine         亮氨酸         224.4        7.2        458        4.29
                                       
Methionine         甲硫氨酸         53.7        6.68        195.6        4.25
                                       
Methionine(by MRM)         甲硫氨酸         53.9        5.71        200.5        3.42
                                       
Ornithine         鸟氨酸         212.5        5.98        602.7        4.41
                                       
Phenylalanine         苯基丙氨酸         123.9        4.97        482.1        4.1
                                       
Tyrosine         酪氨酸         159        6.89        438.9        4.64
                                       
Valine         缬氨酸         236.6        5.89        427.8        5.03
                                       
Carnitine         肉碱         65.6        10.1        128.7        9.87
                                       
C2-Carnitine         C2-肉碱         47.6        5.46        87.9        5.45
                                       
C3-Carnitine         C3-肉碱         7.57        10.61        15.07        8.13
                                       
C4-Carnitine         C4-肉碱         1.28        11.84        4.15        8.44
                                       
C5-Carnitine         C5-肉碱         0.68        13.12        2.38        10.92
                                       
C5-DC-Carnitine         C5-DC-肉碱         0.32        12.55        2.49        13.27
                                       
C6-Carnitine         C6-肉碱         0.54        12.73        2.08        8.72
                                       
C8-Carnitine         C8-肉碱         0.63        15.53        2.14        6.86
                                       
C10-Carnitine         C10-肉碱         0.66        8.75        2.05        6.29
                                       
C12-Carnitine         C12-肉碱         0.71        11.71        2.23        8.41
                                       
C14-Carnitine         C14-肉碱         0.59        19.46        2.08        8.4
                                       
C16-Carnitine         C16-肉碱         4.74        10.05        11.4        6.7
                                       
C18-Carnitine         C18-肉碱         2.54        9.58        7.3         
                                       

注:以上结果为一台仪器、一套标准与样品测试,结果未必适合所有仪器。因此,在实际工作前,必须使用大量的真实样品对方法进行评价。化学试剂的变化、环境、仪器性能、样品的制备过程都会影响结果。所以,结果由上述等复杂因素评价而不是特定条件。
需要的仪器
•        AB SCIEX 3200系列(3200 QTRAP® or API 3200TM)或者4000系列(4000 QTRAP® or API 4000TM)LC/MS/MS系统
•        安捷伦1100/1200 HPLC二元泵系统G1312 A,带96孔板的自动进样器以及可加热的柱温箱或 岛津HPLC系统,包括系统控制器、2个LC-20AD液相色谱泵,SIL-20AC自动进样器或CTC自动 进样器,柱温箱
•        Chromsystems干血片氨基酸和酰基肉碱分析方法包,该方法包含样品盘,提取和衍生试剂,缓 冲液,内标物(www. Chromsystems.com)
•        流动相(www. Chromsystems.com)
•        一个微孔板的振动器600 rpm
•        1/8"英寸打孔器
•        移液管和标准玻璃器皿 

订购信息
产品名称        订货号
iMethodTM Test for Research Into Inborn Errors of Metabolism Version 1.1 for Cliquid® Software         5008155


氨基酸分析
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质谱检测
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药物代谢
cuturl('http://www.absciex.com.cn/applications/drug-discovery-and-development-mass-spec/drug-metabolism')