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标题:【求助】第二相跑了将近10个小时，晕乎！

kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】第二相跑了将近10个小时，晕乎！

有没有人碰到这种情况？
我用的是11cm胶条，ph3-10，
电泳设备Amersham Ettan DALTsix，一块胶
电泳缓冲液配置正确，6L，不调PH
程序：
S1 3W 45MIN
S2 20W 6Hr
S2 20W 3Hr 40MIN
本来以为S2 跑5小时足矣，没想到一直跑到今天凌晨。
各位大虾给分析一下，我是新手，第一次跑2D。
现在已经开始染色了，先回去睡一觉……
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发表于 2014-3-20 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先考虑检查配胶用Tris-HCl缓冲液的Ph值
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发表于 2014-3-20 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10小时有点不正常了,现在结果出来了吗,电泳缓冲液不用调PH,配胶缓冲液PH8.8,一般一块胶的话时间可能长一点,但是也不会超过6个小时,哪里出问题了呢
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Tris-HCl缓冲液的Ph值 酸度计调过的，8.8没错。
跑出来的胶见下图,点不多，我估计跟上样量有关。
TO:zsp820620,谢谢师姐这些天来的指导：-）


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utt0989[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Tris-HCl缓冲液的pH值偏低，我以前也遇到过这种情况。调过以后就好了。
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发表于 2014-3-20 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先要检查丙西酰胺胶中sds的浓度,因为sds带负电,sds量直接影响电泳速度
如果sds没问题,把电泳缓冲液更新了,尤其上槽液一定要是新配的
再没问题了,检查丙西酰胺胶中Tris-HCl缓冲液的pH值,要用精确ph计校准
都没问题,只有把丙西酰胺重配了
我最可怕一次17cm胶跑了20个小时,一晚上完全没睡- -!,后来发现是我们实验室的加样枪不准,缺了一半,sds加少了一半........
把sds配准后就基本没事了
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑完后电压是多少？如果很低的话，应该是上槽液漏了
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跑完后电压是多少？如果很低的话，应该是上槽液漏了
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-3-20 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电压约150V，不知道你说的上槽液是什么。
上周又跑了一块，调整了上样量，一样跑了9个多小时，电泳缓冲液没换，感谢bennyxiong的分析，下次再配置的时候我会留意。
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 小中大

我用的也是GE的ETTAN DALT SIX ,我现在二维电泳也要10小时,请问斑竹你现在有没有改进啊?
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