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标题:【求助】超声处理与Triton X-100的作用

caihong[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】超声处理与Triton X-100的作用


各位前辈大侠们：
我想请教一下，我现在做关于细胞氧化还原的实验，看的文献中关于“细胞处理”的时候，提到了超声处理与0.1% Triton X-100，我想询问这两种应如何应用？先声处理还是先加入0.1% Triton X-100破膜？加入0.1% Triton X-100作用后是否还需要去除？
作为初作试验者，急需指教！！
多谢！
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声处理是要断裂DNA，我想应该先0.1% Triton X-100破膜。
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是收集重组蛋白，细菌先超声处理再加Triton－100，然后直接离心，不需再去除
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是要测细胞内一个酶的活性，是不是应该先超声再加Triron呢？
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PBS中溶解终浓度为2mM的DTT，然后在上述溶液中重悬培养细胞，超声12-15s*3次，45W，可获得良好的破膜效果，由于没有变性剂，酶活性也能很好的保存，我们一直用这个来提取蛋白测定活性，可以试一试。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-3-20 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vivian4123 于 2014-3-20 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

PBS中溶解终浓度为2mM的DTT，然后在上述溶液中重悬培养细胞，超声12-15s*3次，45W，可获得良好的破膜效果，由于没有变性剂，酶活性也能很好的保存，我们一直用这个来提取蛋白测定活性，可以试一试。 ...

先谢谢你的回复！
我想问一下超声后的DTT是否需要去除呢？如何去除呢？
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-3-20 21:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先用tritonX-100,在超声处理,效果更好,如果你是测DNA含量,和酶的活性
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-3-20 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声处理一步就可以破膜了，Triton可以溶解膜蛋白。
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发表于 2014-3-20 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先加Triton再超声，triton不仅可以溶解膜蛋白，也可以促进其它蛋白溶解，减轻超声过程对某些蛋白的破坏。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-3-20 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先谢谢各位高手指教！
还想请问，加了Triton再超声后，Triton是否要去除呢？如何去除呢？还是不用去除，直接测指标呢？
多谢多谢！
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