小中大但不是“转化”的菌，而是原来本身的菌。这句是什么意思。
我的实验步骤：
1 DH5a单菌落接种于2mlLB培养液中，37度振荡培养过夜。次晨按1：100转种于5ml LB培养液，37度剧烈振荡培养3小时。从中取1ml置冰浴中冷却10分钟，8000转离心2-3分钟（普通高速离心机未用低温的）收集菌体，沉淀重悬于200ul冰浴冷0.1mol/mlCaCl2中，冰浴20分钟，8000转离心2-3分钟收集菌体，重悬于1mlCaCl2中1小时以上即可作为感受态细胞使用。
2 将2-3ul载体DNA转化感受态细胞200ul，冰浴45分钟，37度热休克5分钟（我看书上都是42度90秒但老师说37度更温和一点），再冰浴2分钟，加入LB培养液500ul，37度振荡培养1小时，200ul涂布于LB平板上（含氨苄100ug/ml）
我重复了两次，平板上干干净净，什么都没长。载体应妹晃侍猓?易???芭芄?缬炯?ul跑的条带很亮，请帮忙给我指导看看什么地方让我失败了。我以前学的不是分子生物，有些原理不是特别懂。现在实验做的非常不顺利，马上就要毕业了，我很着急，希望大家能帮帮我。谢谢！
......
=============================================================================================================
你提到，可能直接用了含质粒的菌，然后转化你的感受态。而质粒转的没有长菌。所以我认为你的第二管转出来的不是感受态接受质粒后的菌，而是你加进去的菌。
原因：
1. 如果是菌，你用的是37度热激，那还活得好好的；
2. 如果是菌，37度不会裂解释放质粒，何来转化一说？
3. 如果是质粒，为什么同样的操作在第一管没菌呢？
不管是什么， 不追究了，长出来了，就提一些质粒留着吧，免得折腾没了。
关于你的感受态制作方法，
1. 我认为冰浴时间可以延长；
2. 8000转没意义的，不知道多少g；反正速度不能太高，能离下来就行；
3. 没用低温？为什么？一定要低温操作；
关于你的热激转化，
1. 从没用过37度，不知道会怎样；
个人意见供您参考。
