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标题:【求助】SDS-PAGE问题

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发表于 2014-3-23 22:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE问题


最近一段时间电泳一直跑不好，跑胶时有一部分样品在上样孔中跑不下去，出来的带很难看，比正常的宽，模糊。不知道该怎么形容。看图片吧。我一般都是加上样buffer后煮沸5min，时间应该够，而且他们有煮10min的，也是跑的这样。loading buffer也换过了，还是不行。不过应该是样品处理的问题。因为我超声波破碎后再跑就正常。有碰到过这种问题的吗？原因是什么？谢谢。
中间的那条带就是直接煮的样。


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2014-3-23 22:38
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发表于 2014-3-23 22:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你换个tris试试看，我以前跑的也是很模糊，后来换了个amresco的tris后就好了
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发表于 2014-3-23 22:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1。是否是电泳缓冲液陈旧，更换电泳缓冲液看看；
2。样品蛋白浓度太高（或菌量太多），加入loading buffer后蛋白有凝块，或加入loading buffer速度太快，也会出现凝块，这样电泳时有拖尾；
3。你上样时估计样品溢出了上样孔，因为marker条带中也混有样品条带。
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2014-3-23 22:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看看会不会是这个原因
样品的盐浓度太高会引起样品条带挤压旁边的marker条带
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发表于 2014-3-23 22:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看不出来样品条带挤压旁边的marker条带
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-3-23 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白的上样量大的缘故
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发表于 2014-3-23 22:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看有的帖子说
如果有核酸的话
就会出现象你图片上的竖带
而且超声处理后带型变好
就是因为把核酸处理掉了吧
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发表于 2014-3-23 22:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
煮的时间长一点，估计是上的样有沉淀在里面，你煮完之后离心沉淀一下试试
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-3-23 22:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我遇到过
我把样品有煮了5分钟
离心后
轻轻取上清上样就好了
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-3-23 22:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是标本的上样量过大或蛋白量过大的缘故
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