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标题:【求助】急求高分子量蛋白的聚焦条件

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发表于 2014-3-23 23:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】急求高分子量蛋白的聚焦条件

相关疾病：
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我的样品是肿瘤组织，目标蛋白的分子量在200KD左右，用2D做了几次，高分子量区域都没有点，不知道原因在哪，很郁闷，请各位前辈帮帮忙！我想请教一下聚焦条件，还有分高分子量蛋白的技巧，万分感激！！！
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发表于 2014-3-23 23:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
极高极低的分子量本来就是2D的致命伤，难度比较大。
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发表于 2014-3-23 23:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你主动水化上样看一下.怎样?
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发表于 2014-3-23 23:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果目标蛋白的分子量在100-120KD左右，聚焦条件，技巧方面有什么好的建议？非常感谢
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发表于 2014-3-23 23:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以采用主动水化试试。
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发表于 2014-3-23 23:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

采用主动水化，以可能牺牲部分小分子蛋白为代价，可以稍微延长点低电压水化时间。
另外二相方面也是一样，增加电泳时间，使高分子量的区域分辨率更高，并且配相对低浓度的PAGE胶，如8%-10%，就是最后染色的时候可能不方便操作。
这纯粹是我自己的理解，并不一定正确。
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发表于 2014-3-23 23:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家的帮助，我就是采取的主动水化，而且水化时间都是18小时，不知道是不是还是少，可是聚焦时间的延长，会不会影响DTT发挥作用啊？
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发表于 2014-3-23 23:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

会的，时间长了DTT就失效了，可以在阴极端滴加20mM DTT补充。
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发表于 2014-3-23 23:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，我还想知道怎么在阴极加DTT呢，因为胶上有矿物油覆盖啊？
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发表于 2014-3-23 23:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请前辈们指教一下，如何在中途补加DTT呢？非常感谢！
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