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标题:【求助】蛋白质电泳时LOADING BUFFER中溴酚兰移动速度...

vivian4123[使用道具]
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【求助】蛋白质电泳时LOADING BUFFER中溴酚兰移动速度...


最近做蛋白电泳总是出现溴酚兰不能与蛋白样品同时移动的现象。溴酚兰总是提前跑出凝胶,以致我无法判断样品跑到的位置。
我的胶是10%的,单板胶10mA跑20min不能出现蛋白样品压成一条线的现象。
将电流调至15mA,10min溴酚兰全部跑出凝胶。很明显这时蛋白样品还没有跑开。
我用的是预染的蛋白marker,电泳时紫色的指示剂也很快就跑出凝胶了。只能靠蓝色marker条带判断蛋白样品跑的位置。
原先以为是我们的LOADING BUFFER配制有问题,但是借别的组的LOADING BUFFER(他们使用很正常),跑在我们的胶上仍然出现这样的情况。
请问怎么解决??
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skytree[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 vivian4123 于 2014-3-23 23:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

最近做蛋白电泳总是出现溴酚兰不能与蛋白样品同时移动的现象。溴酚兰总是提前跑出凝胶,以致我无法判断样品跑到的位置。
我的胶是10%的,单板胶10mA跑20min不能出现蛋白样品压成一条线的现象。
将电流调至15mA,10min溴酚 ...

胶没有问题吗?
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bling[使用道具]
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应该是样品的问题吧,不知是什么样的样品?
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vivian4123[使用道具]
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只能怀疑胶的问题或是电泳缓冲液的问题了。。。
排查中。。
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vivian4123[使用道具]
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先把本次实验的结果发上来 大家帮忙看看我把胶跑成这样是什么原因?


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12xunmei[使用道具]
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不知道你的胶是怎样制作的?制胶的过程中一定要保证充分混匀,保证胶的质地均匀,这样跑出来的条带才能均匀、整齐,溴酚兰和样品一致,还有胶的各成分比例一定要合理,跑电泳时要放到水平面上,你可以从以上几点找找原因,希望对你有用。
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sunshine039[使用道具]
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我也出现了这样的问题,你再重新测定一下溶液的PH值,看是不是PH的问题,我的就是这么解决的
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junhun[使用道具]
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我也觉得可能是缓冲液的问题,我也出现过类似问题,等到溴酚兰跑出胶了,染色发现蛋白才跑了一般,换了配缓冲液的试剂就好了
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vivian4123[使用道具]
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多谢高手指导。
我再重配试试看看。
再请教高手一下,我的电泳样品这种状况是降解了还是上样量过大?
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leifengta[使用道具]
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从图上看可能是上样量过大,样品不能反复冻融,这样可能会加速降解;还有保存时间有一定期限;染色时不能太深。你可以从以上几点尝试着找原因,试验的过程也是一个摸索的过程。
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