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标题:【求助】蛋白质电泳时LOADING BUFFER中溴酚兰移动速度...

zzzz[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质电泳时LOADING BUFFER中溴酚兰移动速度...

最近做蛋白电泳总是出现溴酚兰不能与蛋白样品同时移动的现象。溴酚兰总是提前跑出凝胶，以致我无法判断样品跑到的位置。
我的胶是10%的，单板胶10mA跑20min不能出现蛋白样品压成一条线的现象。
将电流调至15mA，10min溴酚兰全部跑出凝胶。很明显这时蛋白样品还没有跑开。
我用的是预染的蛋白marker，电泳时紫色的指示剂也很快就跑出凝胶了。只能靠蓝色marker条带判断蛋白样品跑的位置。
原先以为是我们的LOADING BUFFER配制有问题，但是借别的组的LOADING BUFFER（他们使用很正常），跑在我们的胶上仍然出现这样的情况。
请问怎么解决？
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶没有问题吗？
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是样品的问题吧，不知是什么样的样品？
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zzzz[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

只能怀疑胶的问题或是电泳缓冲液的问题了。。。
排查中。。。
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zzzz[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先把本次实验的结果发上来 大家帮忙看看我把胶跑成这样是什么原因？


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ero11[使用道具]
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发表于 2014-3-25 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道你的胶是怎样制作的？制胶的过程中一定要保证充分混匀，保证胶的质地均匀，这样跑出来的条带才能均匀、整齐，溴酚兰和样品一致，还有胶的各成分比例一定要合理，跑电泳时要放到水平面上，你可以从以上几点找找原因，希望对你有用。
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发表于 2014-3-25 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也出现了这样的问题，你再重新测定一下溶液的PH值，看是不是PH的问题，我的就是这么解决的
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-3-25 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也觉得可能是缓冲液的问题，我也出现过类似问题，等到溴酚兰跑出胶了，染色发现蛋白才跑了一般，换了配缓冲液的试剂就好了
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zzzz[使用道具]
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发表于 2014-3-25 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢高手指导。
我再重配试试看看。
再请教高手一下，我的电泳样品这种状况是降解了还是上样量过大？
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-3-25 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从图上看可能是上样量过大，样品不能反复冻融，这样可能会加速降解；还有保存时间有一定期限；染色时不能太深。你可以从以上几点尝试着找原因，试验的过程也是一个摸索的过程。
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