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标题:【求助】棉花的2D图－－不知出了什么问题

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发表于 2014-3-27 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】棉花的2D图－－不知出了什么问题


小弟是2D的新手
最近作了棉花的2D
横纹很严重
不知是什么原因
请高手指点，谢谢！！！！
我用的是9M urea, 4% chaps ,加上两性电解质溶解样品。
水和的是8M urea, 2% chaps
按照4％加DTT到二者的混合溶液
13cm PH 3－10 400μg 上样量
但聚焦只能到3000
没有办法只能在3000v保持10h


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2014-3-27 08:55
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发表于 2014-3-27 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是由于电压上不去造成的吗
还是dTT太多
或者是其它原因
怎样才能解决
谢谢
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发表于 2014-3-27 08:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对了忘记说了 我在分离胶上加了1ml 的4％浓缩胶
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发表于 2014-3-27 08:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

估计是盐离子浓度太高，可以考虑增加低压除盐的时间。
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发表于 2014-3-27 08:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

估计是盐离子浓度太高，可以考虑增加低压除盐的时间。
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发表于 2014-3-27 08:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用丙酮沉淀下，或用试剂盒处理一下，感觉样品没处理好
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发表于 2014-3-27 08:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
推荐GE的2-d clean-up Kit
除盐
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发表于 2014-3-27 08:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是我第二次做的
比第一次好点
可是任然不好
这次我500v 3h
而且梯度很多
但最终只能到5000v
郁闷


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发表于 2014-3-27 09:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来还是电压上不去问题
有人说是
仪器问题
我用的是pharmacia biotech的
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发表于 2014-3-27 09:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没做过棉花，但棉花里还有棉酚，这个成分是碱性的，可能会影响聚焦。
建议还是把蛋白纯化一下吧！
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