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标题:【求助】关于BCL-2蛋白的提取

tudou85[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于BCL-2蛋白的提取


请问如果做BCL-2的western Blot,是提胞浆蛋白还是提胞膜蛋白呀?
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

bcl-2应该属于线粒体相关蛋白吧，我做的时候，提取的总蛋白，上样量是60ug/孔，一抗是SANTA CTRUZ的，用的浓度是1：700，条带做出来很清楚，重复了三次以上，结果与预期相同
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提总蛋白就可以了，我刚做过，条带不错。
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发表于 2014-3-27 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上能告诉一下做BCL-2的转膜条件吗？做了几次，都没能做出来，郁闷，谢谢！
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恒压80V转2h
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的问题可能不是出在提蛋白那一步，要不说说其他情况，看能不能够帮到你！
你提的同一批蛋白有没有做内标，情况样？
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tudou85[使用道具]
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 小中大

我提的蛋白没有做内标,蛋白量200ug/孔,用的是5%的浓缩胶，12%的
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u234[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提bcl-2总蛋白裂解液配方是什麽，文献上的都不清楚，新手请赐教，不胜感激。
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u234[使用道具]
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发表于 2014-3-27 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用膜NC还是PVDF膜，湿转还是半干转，谢谢
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