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标题:【求助】分子量27的蛋白转膜时间？

dog002[使用道具]
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发表于 2014-3-28 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分子量27的蛋白转膜时间？


我提的是核蛋白P27， 我们实验室一般是400MA，10V，请问转膜多长时间比较好？我师姐说是25分钟应该可以，不过她们也没做过。27是不是属于不大不小的分子量？
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发表于 2014-3-28 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

25分钟有点短。
转膜条件需要摸索。
个人经验，27Kd，250mA, 1小时足够了。
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-3-28 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看这里讨论的转膜时间都是1小时，几小时的，怎么我们实验室的都是几十分钟啊，25到40不等的，很少上一个小时的。
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发表于 2014-3-28 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。
具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。
其实20-30分钟当然也能转过去一部分（或者全部），主要是担心转膜不彻底。如果只是鉴定的话，也无大碍。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-3-28 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
湿转，100V，2h
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发表于 2014-3-28 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做一个27kd的蛋白，转膜100v 1小时，丽春红染色未见条带，转膜后的胶考染也是空白，估计转过
第二次100v 35分钟，丽春红看见条带，量还可以
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发表于 2014-3-28 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我有次用100mA 5小时湿转，有做出条带。
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-3-28 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
湿转，100V，35min
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发表于 2014-3-28 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己的经验，21KD的，80v,50min,效果良好！
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-3-28 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做p27,80V, 80min,效果很好
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