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标题:【求助】关于修饰后蛋白质的晶体结构的问题?

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1
 

【求助】关于修饰后蛋白质的晶体结构的问题?

我们实验室得到一个蛋白,分子量35KD,有活性。用PEG5000修饰,修饰率在5-13个赖氨酸位点。老板想知道是否蛋白的空间结构影响了PEG修饰率总是在5-13这个范围,所以想做一下蛋白结晶的空间结构,请各位高手帮忙分析一下:
1.因为我们的基因不是新的,蛋白结晶早有人得到并报导过,那我们是否就不需要自己做结晶然后空间分析了?
2.单单从x-ray分析得到的空间结构,即赖氨酸在空间结构里的位置,能说明为什么我们的PEG修饰为什么总在5-13这个范围麽?
3.是否需要分析我们修饰后的蛋白的空间结构?但我们修饰的蛋白因为PEG化的程度不一,蛋白质溶液应该是许多不同分子量的混合物,这样还能做空间结构分析麽?
4.另外老板还想看一下我们的蛋白有没有二硫键存在,需要自己分析一下我们蛋白的空间结构还是可以参考网上已经发表的空间结构信息?PEG的修饰是否不可能影响蛋白原有的二硫键?
我是分子专业的,很少接触蛋白的研究,在这方面一无所知,请大家多多帮忙,谢谢了!
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huifeng0516[使用道具]
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2
 
没有做过PEG修饰蛋白方面的工作,说说我了解的,希望高手补充。
1 这个蛋白质晶体已经报道过了,你们的确没有必要再做了,除非以前的报道有重大的缺陷,你们的结构有可以补充说明的地方。在文章的discussion 部分,完全可以用报道的结构做文章,下载PDB文件,用软件作图,在不更改结构的前提下,想画成啥样就画成啥样,只要能说明问题。
2 PEG是不是一定要在空间上足够靠近赖氨酸,才能发生修饰呢?那么包埋在分子内部的赖氨酸是不是就不能被修饰?
3 不同修饰度的蛋白质分子聚集在一起,要结晶有难度,很难。不过干吗不试一试呢?
4 一级结构100%一样的话,那么二硫键的情况也是一样的。
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3
 
1.PDB的文件我打开看了看不懂的,不知道用什么软件作图?我希望能看到所有的氨基酸在空间的什么位置,不知道能不能实现?即使把这样的图做好了,就可以简单的从赖氨酸是在空间的表面还是内部来判定是否可以被PEG修饰麽?
2.赖氨酸和PEG通过C-N键结合,应该是需要很接近的吧?这个我也不是很清楚。
3.楼上说结晶有难度,那还是有这个可能麽?那结晶后分析的空间结构到底算哪个蛋白质分子的呢?另外,听说NMR可以不用结晶,但也存在同样的问题,就是蛋白质分子不统一
4.我在PDB网站上看到那种空间的模型了,但是对这个网站不熟悉,不知道怎么看或者到哪里看有没有二硫键,望指导。
多谢了
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4
 

对不起,不知道怎么发了两遍,斑竹不会生气吧?
我在stucture analysis选项里Molprobity ramachandran plot点开了一个结果,有些类似地形的图,下面有这种注释:
There were 9 outliers (phi, psi):
A 9 GLY (-134.9, 93.2)
A 17 LYS (-61.1, 14.0)
这是什么意思呀?帮忙看一下17lys是说有17个lys麽?-61.1是什么意思?14.0又是什么意思?感谢......
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PyMol , coot, Cn3D这三个软件在哪里下?免费的麽?在PDB网站不能直接看麽?
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我在stucture analysis选项里Molprobity ramachandran plot点开了一个结果,有些类似地形的图,下面有这种注释:
There were 9 outliers (phi, psi):
A 9 GLY (-134.9, 93.2)
A 17 LYS (-61.1, 14.0)
这是什么意思呀?帮忙看一下17lys是说有17个lys麽?-61.1是什么意思?14.0又是什么意思?感谢........
......

==============================================================================================================

那个“地形图”是 Ramachandran plots 。stucture analysis 里的 Ramachandran plots 用来表示该蛋白质内所有氨基酸残基的二面角。
Ca 联结的两个键是单键。 Ca-Nn , Ca-Cn+1 , Ca-Nn 旋转角度为 Phi ,Ca-Cn+1 旋转角度为 Psi ,看上去似乎 Phi Psi 可以为任何角度(-180-180),但由于一些原因,Phi Psi 是有限制的。
There were 9 outliers (phi, psi) 表示的意思可能是 有9个残基的 Phi Psi 处于不合理状态。A 9 GLY (-134.9, 93.2) 表示 A 链第9个氨基酸残基 (Gly) 的Phi Psi 是 (-134.9, 93.2) 。
氨基酸的Phi Psi 不合理既有可能是蛋白质本身构象的影响,也可能是由于测量,计算等原因造成。
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bling[使用道具]
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PyMol , coot, Cn3D这三个软件在哪里下?免费的麽?在PDB网站不能直接看麽?

=========================================================

网上应该可以找到免费下载用于 windows 的版本,PDB网站不能直接看。
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QUOTE:
原帖由 bling 于 2014-3-29 10:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我在stucture analysis选项里Molprobity ramachandran plot点开了一个结果,有些类似地形的图,下面有这种注释:
There were 9 outliers (phi, psi):
A 9 GLY (-134.9, 93.2)
A 17 LYS (-61.1, 14.0)
这是什么意思呀?帮忙看 ...

哇,这么专业呀,实在太感谢了,斑竹应该奖励分的。软件我先找找看,不过我还有一个困惑:我的蛋白有的被修饰了5个PEG,有的6个,有的15个等等,而且修饰的位点还有可能不一样,这样得到的蛋白质其实是好多种蛋白质分子的混合物,这样能做结构分析麽?得到的结果会不会很错乱,因为看文献好像最终算好的结构有个分辨率的问题,要排除本底干扰的,不知道我这样的还能不能做?再者,我想我能不能把其中一种分子量的分子,比如说修饰了5个PEG的蛋白分离出来然后再做结构分析?这样的蛋白分子,原子种类和数目都是一样,只是不同的蛋白分子PEG修饰的位点可能不一样,这样会不会有之前一样干扰的问题呢?
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我从PDB网站上下了好几个文件,但用cn3D都打不开,不知道是应该打开哪个文件,其中一个是PDB文件呀,怎么也打不开呢?
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bling[使用道具]
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一样的分子结晶机会大。如果分子不一样,机会小,甚至无,就算结晶,晶体也可能很小而无法测定。看楼主这样的情况,恐怕很难得到满意的结果。
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