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标题:【求助】为什么背景这么深?

30moonriver[使用道具]
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【求助】为什么背景这么深?

3月开始做wb,起初结果一直还好,条带清晰,背景淡,但是最近两次背景相当深,几乎掩盖条带,在暗室曝光的时候可以看到整张膜发白光,会是什么原因呢?请各路高手不吝赐教
实验条件和原来一样
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了了[使用道具]
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我也有过这种现象,多洗会,觉得抗体是不是溶度高了
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锤子[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 30moonriver 于 2014-3-29 10:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
3月开始做wb,起初结果一直还好,条带清晰,背景淡,但是最近两次背景相当深,几乎掩盖条带,在暗室曝光的时候可以看到整张膜发白光,会是什么原因呢?请各路高手不吝赐教
实验条件和原来一样 ...

为什么是发白光呢。应该是发绿光啊。
把抗体的浓度降低。
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一抗是新鲜的,还是重复用的?
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30moonriver[使用道具]
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一抗是新鲜的,以前即使是反复使用的一抗也能做出很好的结果
请问封闭和孵2抗的效果会受气温影响么
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是不是原来每次做一张膜,而现在同时做多张?
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30moonriver[使用道具]
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我的实验材料 试剂和方法和以前都是一样的呢
而且我们实验室的其他人也都出现了同样的情况
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我也出现过类似的情况。
建议更改膜。
最可能的就是膜发生了污染,可以启用另外一批。
然后就是滤纸。
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我感觉是膜洗的不够干净
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30moonriver[使用道具]
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二抗是按1:5000稀释的 不过最近换了一支二抗(同一家公司)
会有影响么?
洗膜的次数和时间跟原来也是一样的呢
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