小中大
我提的是脑组织中蛋白,效果很好,量也很多,你可以参考一下。
组织中蛋白质的提取
1. 准备工作:
准备冰盒,枪头盒入4度冰箱预冷;
准备1套1.5MlEP管,2套0.5MlEP管并写上标记放入冰上,加样枪;
配制细胞裂解液与PMSF,比例为10:1,入4度冰箱保存。
2. 将匀浆器放入冰盒内,加入一定量细胞裂解液;
3. 从液氮中或-80度冰箱中取出组织,一个组织一个组织匀浆,用微量加样枪收集匀浆器中的细胞裂解液至1.5ml EP管,冰浴30分钟。
4. 超声1s,间隔5s, 连续5次(以不粘稠为准),样品超声时安置于冰浴中,以免产热;
(注:超声柱子要用双蒸水冲洗干净,再用70%乙醇擦拭1-2次,用双蒸水冲洗干净,最后用纸巾擦干)
5. 离心,4度,15000rpm, 1h;
6. 用预冷的枪头小心取上清,避开脂质,移入写有标记的0.5ML EP管中,并分装20Ul至另一0.5Ml EP 管中(定量用)。放入-70度冰箱保存。