蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请教高手2D碱性端横纹的解决办法（附图）

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 20  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】请教高手2D碱性端横纹的解决办法（附图）

txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1

发表于 2014-4-2 21:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教高手2D碱性端横纹的解决办法（附图）


我的2D图经常在碱性端横纹，经过多种方法时好时坏，不能很好解决。请教高手帮忙分析一下图中出现横纹的原因。谢谢！
另外聚焦时电压可以上升到9000V以上，总的电压达到10万KVh.而且两个样品一起跑时明显不如单个跑的好。


查看积分策略说明
附件
2014-4-2 21:19
20935530.jpg (36.39 KB)
 
顶部
ztonyc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114511
精华 0
积分 293
帖子 286
信誉分 100
可用分 2207
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
2

发表于 2014-4-2 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

连中性pH区域都有这么多横条纹,所以先把这个问题解决了.
不单单是碱性区域的问题,或者你的IPG是pH9-12的
顶部
txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
3

发表于 2014-4-2 21:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上，用的3－10NL的胶条，的确，这些横纹从中性区就开始有，我用的Bio-Rad聚焦仪。而且单个的时候要好些。不知是什么地方出了问题，还请多各位朋友不吝指点。
顶部
tie8[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75844
精华 0
积分 442
帖子 543
信誉分 100
可用分 3571
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
4

发表于 2014-4-2 21:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #3 txwuyan 的帖子

可能是DTT加多了
顶部
txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
5

发表于 2014-4-2 21:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 tie8 的帖子

感谢你的提醒。我平衡是时的DTT配成0.1每5ml,按BIO-rad 上的说明加的，这样是否加多了，请问该加多少合适呢。
顶部
ztonyc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114511
精华 0
积分 293
帖子 286
信誉分 100
可用分 2207
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6

发表于 2014-4-2 21:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

IAA才容易造成horizontal streak,DTT不会,多点没关系的了
顶部
txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
7

发表于 2014-4-2 21:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上觉的我的胶IAAI少了吗，我的IAA是每5ml 平衡母液现加0.125g,欢迎讨论。
顶部
PPT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75223
精华 0
积分 248
帖子 195
信誉分 100
可用分 1776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2014-4-2 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
平衡时的DTT多点关系不大（我用的是0.1g/10ml平衡液），关键是聚焦时候的DTT，我的经验是不超过25mmol，多了就容易出现横纹。
顶部
txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
9

发表于 2014-4-2 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

聚焦时我的DTT浓度为65MMOL，是按操作说明的，以前也是这样，有时聚焦不很好。我查了文献我的情况和Amersham 上说的聚焦不足有些类似，但提高聚焦时间也未见明显好转。能能否和你单独交流一下


查看积分策略说明
附件
2014-4-2 21:59
36741068.jpg (32.2 KB)
 
顶部
tudou85[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77498
精华 0
积分 394
帖子 468
信誉分 100
可用分 3171
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
10

发表于 2014-4-2 22:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你的上样量是多少，上样量大比小横纹明显多，
有没有用clean-up kit,
样品来源是什么？
RUNNING BUFFER是否干净?
顶部
 20  1/2 12››