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标题:【求助】做WESTERN封闭时使用3%BSA和脱脂牛奶有什么区别？

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做WESTERN封闭时使用3%BSA和脱脂牛奶有什么区别？


听说用3%BSA封闭效果要好一些，是这样吗？
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有，BSA 和 BSA V有什么区别？
BSA V能否用于封闭呢？
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2541[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直用脱脂奶粉，效果挺好。朋友做过用bsa封闭，背景会较高。
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hustwb[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人感觉如果是抗体说明书上要求用BSA封闭的话那肯定是要比用牛奶封闭效果好了，至于用牛奶封闭的效果比不上BSA,似乎只是某些战友的经验而已，小弟曾经试过用5%的牛奶和5％BSA比较了一下效果，总体上看来没什么区别的。
（小弟用的奶粉是完达山的，BSA买的sigma分装的）
所以，个人以为，如果一抗的说明书上没有标明必须用BSA封闭，用牛奶就足够了，起码比用BSA省银子呵呵
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2541[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不过我用的是试剂公司的专业脱脂奶粉，去蛋白酶和磷酸酶的，还是有必要的，特别是做磷酸化蛋白。
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tudou85[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

听说牛奶中含有少量的碱性磷酸酯酶，如果用AP显色可能背景会比较高，用HRP没问题。
只是听说而已，自己没验证过。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教一个protocol上的单词Blotto，我找了好久都没找到，
原句是这样的：
Block non-specific binding by incubating membrane in Blotto(either Blotto A or Blotto Ｂ；IgG -free BSAis recommended when using anti-bovine secondary antibidy) for 30--60 min at room temperature.
另外，这里说的IgG-free BSA时不时就是一般市售的BSA啊？
我的一抗是羊抗人的，二抗是抗羊的，照它说的是不是封闭液最好用羊血清啊？？？
比较急，望达人相助，万分感谢！！！
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-4-5 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的这个protocol可能是某个牌子的western 试剂盒中提供的protocol的，Blotto，either Blotto A or Blotto Ｂ是指这个试剂盒中公司提供的两种封闭液的名字（代号），取名叫做Blotto而已，实际上就是BSA配置的封闭液．
个人感觉没有必要用羊血清，脱脂牛奶效果已经很好了，又便宜，重要的一点就是牛奶配置的封闭液静置后出现絮状沉淀一定不要用了，否则作了一天的工作可能因为这个小的问题而前工尽弃．还有就是封闭的时间一定要够，个人感觉这个十分重要
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