蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请大家鉴定一下我的蛋白电泳图(新增浓缩后的图)

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】请大家鉴定一下我的蛋白电泳图(新增浓缩后的图)

ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1
 

【求助】请大家鉴定一下我的蛋白电泳图(新增浓缩后的图)


1-7是阳性转化子,8是9k空质粒对照。9是marker,分别为14.3, 20.1, 29, 44.3, 66.4, 97.2
请大家看看我的里面有没有多出的条带?我的目的蛋白43kD。可能浓度太低,我今天浓缩重新跑。
再请问蛋白能否用酒精沉淀,洗涤,再用水溶解后跑?酒精沉淀了,蛋白还能复性吗?
请指教,谢谢!!


查看积分策略说明
附件
2014-4-5 10:52
29088430.gif (56.62 KB)
 
顶部
sunshine039[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74211
精华 0
积分 253
帖子 205
信誉分 100
可用分 1821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
2
 

一般习惯看胶加样孔在上方,发文章的时候也是的。
以我个人看,不能判断43 kDa 处有没有多出的条带。
蛋白用酒精沉淀,洗涤后,不能再用水溶解,但也许可以用来跑胶。
酒精沉淀蛋白质后,理论上可以复性。(难度:五星级)
一星级难度: 核酸抽提,酶切,核酸及蛋白质电泳
二星级难度: PCR,质粒构建
三星级难度: 质粒表达
四星级难度: 重组蛋白纯化
五星级难度: 天然水溶性蛋白纯化,变性蛋白复性
超星级难度: 膜蛋白纯化,复性
顶部
ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
3
 
您说不能判断,是不是因为浓度太低了?
酒精沉淀的蛋白,可以用来跑蛋白电泳吗?会不会对电泳有影响?
请指教,谢谢
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
4
 

对,的确是浓度太低,我判断不出来。
第二个问题我真的不知道,没有做过,(但只要把酒精彻底会发干,我觉得还是有希望做电泳的),希望有做过的战友能给您确切的解答。
顶部
ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
5
 

我已经加大浓度了,到时候再让您指点。
谢谢!
顶部
ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6
 
丙酮沉淀是不是更好呢?
顶部
ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
7
 

这是浓缩后的胶。我的目的条带应该在43KD。
请各位战友指教,谢谢!!
1-10分别为
上图的1,2,3,4,7,9,10为转化子,5,8为空质粒对照,6为marker


查看积分策略说明
附件
2014-4-5 11:00
35387983.gif (59.61 KB)
 
顶部
30moonriver[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108873
精华 0
积分 296
帖子 252
信誉分 100
可用分 2097
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
8
 
好像没看到你的目标蛋白。是否是你的蛋白表达量过低?尝试用其他方法检测目的蛋白吧。不过,即使有,但表达量太低,可能实际意义不大。
顶部
ns5fan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114518
精华 1
积分 416
帖子 510
信誉分 101
可用分 3353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
9
 

谢谢您的回复!
可是用其它的方法检测,成本太高了。
如果能表达成功的话,把诱导条件优化一下,应该还可能提高的吧。
顶部