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标题:【求助】取大鼠的脑组织做WB还要灌注吗?

pou[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】取大鼠的脑组织做WB还要灌注吗?


听说做WB要用新鲜组织,那要取大鼠的杏仁核不灌注就取怎么能取的出来,那不是跟豆腐一样哪还分的出来啊?
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leifengta[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做WB不一定非得用新鲜组织啊,我们就是在-80度冷藏.
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pou[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是说取脑的那一步是灌注后取还是不灌注直接取?
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 pou 于 2014-4-5 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我是说取脑的那一步是灌注后取还是不灌注直接取?

建议你不要灌注。虽然理论上说，灌注固定后，只是使蛋白变性，但有不少人都说，固定后的组织，做WB做不出来。
虽然，我没有固定后做过WB，但至少固定后的组织内，细胞骨架会形成交联，不利于蛋白的释放与溶解吧。
供参考，祝实验顺利。
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pou[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那就是说直接处死后就取脑啊,那取出来的脑组织会不会象豆腐,还分得清哪里是哪里吗?我现在还没开始做到,所以不太清楚,谢谢指教了!
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chuntian1983[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

新鲜的组织取材在冰上操作，如果时间长了脑组织会变成豆腐状，但新鲜的是很好分辨各区的，取材也比较方便。
说归说，你还是自己操作一只看看吧。
器具：
精细镊子1把和普通镊子一把（取材和把持标本），普通培养皿一只（内盛适量生理盐水或者缓冲液），泡沫盒一个（内盛冰渣，提供4度环境）
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发表于 2014-4-5 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位的指导!请问有谁做过大鼠杏仁核刺激点燃癫痫模型吗,我有一个地方卡住了,就是刺激用的电极,找不到合适的,查资料写要绝缘双极镍铬电极,或者是漆包电极,直径0.1-0.2MM,还要有个尖距要0.025MM,要去哪里弄啊,我去卖电线的那里都没有那么细的,卖受机的那里有够细的,但是又太软了,根本插不进大鼠的脑组织里,真是烦恼,有谁给出个高招啊?真是万分感谢了!
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 pou 于 2014-4-5 11:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢各位的指导!请问有谁做过大鼠杏仁核刺激点燃癫痫模型吗,我有一个地方卡住了,就是刺激用的电极,找不到合适的,查资料写要绝缘双极镍铬电极,或者是漆包电极,直径0.1-0.2MM,还要有个尖距要0.025MM,要去哪里弄啊,我去 ...

刚才咨询了一番一个电生理专业的同事
她给了一点意见：
她说费冰箱上拆下来的漆包线就能用，同样粗细的有硬的有软的，你多逛几家地方，类似于五金商店，应该不难买，不过人家都是按斤卖，如果问你买多少斤你不要惊讶，冷静地告诉他买2米就够了Smile
使用方法：
2根线纽在一起呈麻花状，头短漆刮掉（便于导电），电极尖端剪成斜面，做成间距0.025MM还是有可能的
不过，如果想要回复的更专业一点，你最好到神经生物学板块去求助，那里做电生理的高手比较多。
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