【求助】2d电泳结果图分析

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标题:【求助】2d电泳结果图分析

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求助：样经过pbs和纯水洗过３遍，跑电泳前用蛋白酶抑制剂和ＤＮＡ及ＲＮＡ酶处理过，第一向等点聚焦升压均没问题，第二向跑衡流，起始电流１０mＡ，待溴芬兰成线，提升到３０mＡ，最后结束电压４３４Ｖ，过程中用４度循环水浴冷却，
结果存在两个问题：横向上　横条纹太多太重，不知道该怎么去处
纵向上：蛋白没有分离成圆点，大部分呈雨滴状，请哪位２d高手解释下原因及改进方法，不胜感激

附件

2014-4-5 11:27

91148490.snap.jpg (28.02 KB)

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 fqswdzd 于 2014-4-5 11:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

求助：样经过pbs和纯水洗过３遍，跑电泳前用蛋白酶抑制剂和ＤＮＡ及ＲＮＡ酶处理过，第一向等点聚焦升压均没问题，第二向跑衡流，起始电流１０mＡ，待溴芬兰成线，提升到３０mＡ，最后结束电压４３４Ｖ，过程中用４度循环水浴冷却，
结果存在两个问题：横向上　横条纹太多太重， ...

我认为是上样量太多所致。

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上样量多会引起雨点么?我上了900ng的样,应该不多吧?再少了很多点都看不清了

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你可以看一下amersham 的手册。900ng？我不信，不到1ug，用考染能染成这样？恐怕银染也染不出来吧，单位对吗？蛋白浓度测试的准吗？

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 vvmmoy 的帖子

哦不好意思单位写错了，是９００ug，蛋白浓度误差不会太多，最多上样量１mg，跑了２次了都这样

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你可以用500ug 试试，900我认为也多。要不可以用700

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

补充说一下，我用的是ＰＨ３－１０胶条，是不是用ＰＨ４－７效果好些？

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发表于 2014-4-5 11:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的酸性蛋白是很多，可以考虑用ＰＨ４－７。

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
头痛
这是这周又跑的结果,这张是3-10的胶,上样650ug,明显已经有很多点看不见了,样品用pbs和纯水各洗了4遍,,但是还是横向拖尾严重....
更头疼得是纵向的胶还是都聚成了雨点状,为什么不是圆点,起始电流20ma 2块胶,待溴粉蓝成线60ma 2块胶,5个半小时结束电泳,sds,tris,丙酰胺,AP都现配的,用的伯乐的槽,谁能告诉我为什么啊?

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2014-4-5 11:33

88967525.snap.jpg (31.96 KB)

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2014-4-5 11:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这张是4-7的,上样750ug,效果也不好,还是横纹
然后纵向是雨点,疯了...........

附件

2014-4-5 11:34

30447192.snap.jpg (39.08 KB)

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