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标题:【求助】血清中的蛋白是否要提取？

xingyi08[使用道具]
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发表于 2014-4-5 18:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】血清中的蛋白是否要提取？


我是用western做大鼠血清中高迁移率族蛋白（HMGB1），请问各位大侠：我是用血清直接做？还是要先对血清做蛋白提取？若要提取的话有专门的提取试剂吗？急需帮助！！！
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发表于 2014-4-5 18:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

直接用血清做，可能需要注意稀释的问题，上样前要离心，去除细胞碎片之类的杂质。。。等等
提取血清总蛋白也有相应的kit。
其他的注意事项，可以检索一下本版，western检测血清中某个蛋白的问题都还是有比较多资料的。
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2014-4-5 18:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检一些既往贴子，有一个问题没搞清楚：好多都提到高丰度蛋白的影响，我想问的是我怎么才能知道血清蛋白的“丰度”？怎么才能去除哪些高丰度蛋白？
请大家赐教！！
谢先！！！
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发表于 2014-4-5 18:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xingyi08 于 2014-4-5 18:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
检一些既往贴子，有一个问题没搞清楚：好多都提到高丰度蛋白的影响，我想问的是我怎么才能知道血清蛋白的“丰度”？怎么才能去除哪些高丰度蛋白？
请大家赐教！！
谢先！！！ ...

血清中主要是些白蛋白和IgG，高丰度蛋白就是指这两个，有专门的试剂盒去除，也有人用盐析方法去除一部分。
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-4-5 18:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，我也做这个蛋白，不过血清来源于患者，我想请问您最后用什么显色方法，ECL吗?
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2014-4-5 18:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是ECL,你是怎么去除高丰度蛋白的?有时间交流一下,
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2014-4-5 19:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪里有血清蛋白提取试剂盒？
今天查了很久很久也没找到，
非常急！！！
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utt0989[使用道具]
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发表于 2014-4-5 19:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做血清的western建议先不要去除白蛋白和球蛋白，因为尽管这两种蛋白的含量很高，但是western的敏感度是很高的，一般情况下白蛋白和球蛋白的存在对目的蛋白的检测影响并不大；现在虽然有去除这两种蛋白的盒子，但是在去除这两种蛋白的同时，很有可能造成其他蛋白尤其是低丰度蛋白的损失。
而采用血清蛋白的做实验方法比较简单的有两种，一种是冷冻干燥法，将其冻干，然后溶解后做；另一种就是直接用Sample Buffer溶解后做。
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