蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】500KD蛋白如何浓缩

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】500KD蛋白如何浓缩

mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1

发表于 2014-4-10 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】500KD蛋白如何浓缩


各位高手,我的实验需要提取细胞上清液中一种约50-100NM的小囊泡,为脂质双分子层包裹多种蛋白成分,文献记载用超速离心法可提取.但是它的含量极低,10*6个细胞仅能分泌5ug,直接超速离心的收获率可能不高,我想先将上清浓缩下再超离.由于实验条件和经费有限,不能用离心超滤管,有人说可以用透析法试试.但是我完全不懂透析法,不知道象这么大分子量的蛋白用什么规格的透析袋?能用聚乙二醇吗?分子量要多少?透析后能保持蛋白活性吗?或者有其它更可行的办法(性价比高者更好)?恳请各位高手不吝指点!谢谢!
顶部
damingxia0904[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76226
精华 1
积分 285
帖子 246
信誉分 102
可用分 2011
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
2

发表于 2014-4-12 08:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白不能提纯,整个实验就停了,心情很急,期待答复!
顶部
damingxia0904[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76226
精华 1
积分 285
帖子 246
信誉分 102
可用分 2011
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
3

发表于 2014-4-12 08:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献记载用500KD中空纤维膜可超滤浓缩,不知道要用什么设备?
顶部
damingxia0904[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76226
精华 1
积分 285
帖子 246
信誉分 102
可用分 2011
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
4

发表于 2014-4-12 08:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
等了一天啦！没有人回啊,55555.
各位大侠可不可以指点我一下,或者有哪本书详细介绍蛋白浓缩方法吗?谢谢啦!
顶部
#问号#[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76076
精华 1
积分 226
帖子 167
信誉分 102
可用分 1571
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2014-4-12 08:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

将上清液装到透析袋里，两端封好口，直接埋到聚乙二醇20000或者变色硅胶中即可。个人感觉变色硅胶就很好用，这东西就是很多食品中用来吸湿防潮的，很便宜。干燥时是天蓝色的，吸了湿气就变成粉红色，再放到烤箱里过夜烤干就又恢复了蓝色，可以反复使用。就是注意不要干燥过头，透析带干了会比较脆，不要把上清液漏出来了。
顶部
2541[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75124
精华 0
积分 742
帖子 1144
信誉分 100
可用分 6580
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
6

发表于 2014-4-12 08:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白质浓缩最常用的就是透析和超滤，最好选用超滤浓缩，聚乙二醇20000的粘性太大了
顶部
mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
7

发表于 2014-4-12 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位!
今天有位老师也是建议我用30KD的透析袋,聚乙二醇20000,蛋白会部分变性;也可以用蔗糖浓缩,蔗糖相对温和,再用PBS透析.我想用蔗糖试试看,不过有个笨笨的问题:整个过程是无菌操作吗?哪位大侠有具体的实验步骤?谢谢啦!
顶部
逗号是句号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107985
精华 0
积分 173
帖子 106
信誉分 100
可用分 1246
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2014-4-12 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要是嫌麻烦，就装到30k的透析袋中，挂在空中，用电风扇对着吹，自己估计到里面的液体体积就是了。要是样品上，一个晚上就够了。还不用透析了。
顶部
hold住[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75093
精华 0
积分 566
帖子 832
信誉分 100
可用分 4962
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
9

发表于 2014-4-12 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要是嫌麻烦，就装到30k的透析袋中，挂在空中，用电风扇对着吹，自己估计到里面的液体体积就是了。要是样品上，一个晚上就够了。还不用透析了。

============================================================================================================

这个办法倒是简便，不过估计不透析还是不行的吧，电风扇把水带走了，盐就浓缩了，要是要求缓冲体系在生理条件的话，还是得透析一下。
顶部
mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
10

发表于 2014-4-12 08:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位大侠!操作过程中透析袋里可以保持无菌吗?
顶部
 14  1/2 12››