【求助】做western时待侧蛋白一般都用多少量？

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标题:【求助】做western时待侧蛋白一般都用多少量？

u234[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做western时待侧蛋白一般都用多少量？
有没有大致的一个标准

zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

分子克隆上好像是写的15－30ug吧

131415[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 u234 于 2014-4-12 08:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

做western时待侧蛋白一般都用多少量？
有没有大致的一个标准

10ug足矣.

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

与目的蛋白的丰度有关系，一般细胞可10~30ug，组织要大些，我一般用30~70ug。

hold住[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们一般上60ug

H2O[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好多文献用50微克

owanaka[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

和你的测蛋白仪器及方法有关系．我们学校的一个实验室，按照他们测得的浓度１００ug都做不出。必须把体积扩大10倍，才可以．我认为作出来的量是最好的量．毕竟咱们有些地方的设备和工艺与国外没法比．我的经验是，第一次做，多上几个量，哪个出来用哪个．

pengke1983[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上说的有道理,不可一概而论,毕竟咱们用的和国外用的绝对不完全相同.所以可以做个浓度梯度,自己摸索最佳上样浓度

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发表于 2014-4-12 08:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白的丰度怎样来解释？

damingxia0904[使用道具]
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发表于 2014-4-12 08:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白的丰度就是指的蛋白表达水平的高低，一般指的是固有水平或者基础水平。
像beta-actin这种骨架蛋白表达的丰度就很高，一般10ug蛋白就能有比较浓的条带，有一些信号转导通路分子、膜蛋白或者分泌蛋白就丰度比较低，50ug也不一定有很好的条带。因此对于一个陌生的基因，你必须得先做一个上样量梯度，看哪个浓度既能杂出明显的条带，又能真实反映蛋白的量。有时候上样量过大不能真实反映出趋势的。仅供参考。