【求助】二相是否可以用梯度胶？

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】二相是否可以用梯度胶？

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】二相是否可以用梯度胶？

49888[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2014-4-13 01:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用8%的胶跑了一张2-D图，可是一位教授认为我上部的点分的不够开，其实我觉得很多胶都是上部点比较密集啊。因为第一次用的3-10NL，我觉得如果用4-7或5-8会好些。但他建议我说能否用二相梯度胶，这样增加点之间的垂直距离，而不会改变水平分辨率。可是我很少听说二相用梯度胶的，因为聚焦时蛋白质已经集中在IPG上了，也就是已经在跳直线上了，应该没必要用浓缩胶了。请问二相可以用梯度胶吗？

附件

2014-4-13 01:03

71240567.jpg (29.32 KB)

小螺号[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74175
精华 0
积分 291
帖子 321
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2014-4-13 01:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

梯度胶和浓缩胶的概念是不一样的吧。
梯度胶是指胶的浓度由低到高，凝胶本身有分子筛的作用，这样可以根据分子量的大小进行区分。
而浓缩胶主要是胶的ph变化，进而影响到离子和电场，而使得蛋白质得以浓缩。
我没有用过梯度胶，不过理论上应当是可以的Smile

49888[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2014-4-13 01:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

浓缩胶不是因为浓度较稀，孔径较大，分子筛的作用较少，蛋白能迅速跑到同一直线上吗？Wester blot中常用到。如果二项用梯度胶时怎样灌制呢？因为胶的长度是固定的，要使大分子量的蛋白质得到很好的分离，将牺牲小分子量的分离为代价。楼上说的梯度胶指的是一相的胶条吧？

吉吉0120[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 114483
精华 0
积分 217
帖子 134
信誉分 100
可用分 1448
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态离线

发表于 2014-4-13 01:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二向也是可以跑梯度胶的，效果确实比较好，但是要有专门的灌胶用具。

yysr238[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79378
精华 0
积分 400
帖子 480
信誉分 100
可用分 3233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2014-4-13 01:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

预制胶就是梯度胶,自己做梯度胶的话，重复性比较糟糕,除非你用multi-Casting设备一次性灌很多胶,那么这些胶就可以用梯度胶灌.

remonte[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 114516
精华 1
积分 356
帖子 387
信誉分 102
可用分 2698
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态离线

发表于 2014-4-13 01:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好啊，我现在也在跑18cm得3-10nl的胶条，样品是线粒体蛋白质的材料，不知道是什么原因，图像上一直出现这样的条纹，而且不同的材料之间都有这样纹，从图上看好像是聚焦不好一样，点与点之间有比较多的粘连，8000伏，聚焦64000vh.很长时间了，一直是这样，急啊

49888[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2014-4-13 01:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是新手，可能说得不是很对。如果是聚焦的问题，应该是横向的条纹才是啊。纵向的条纹我觉得可能是平衡的问题，或者是一些高丰度蛋白的缘故。你觉得呢？

小螺号[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74175
精华 0
积分 291
帖子 321
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2014-4-13 01:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 49888 于 2014-4-13 01:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

浓缩胶不是因为浓度较稀，孔径较大，分子筛的作用较少，蛋白能迅速跑到同一直线上吗？Wester blot中常用到。如果二项用梯度胶时怎样灌制呢？因为胶的长度是固定的，要使大分子量的蛋白质得到很好的分离，将牺牲小分子量的分离为代 ...

浓缩胶确实是孔径较大，这样减小分子筛的作用。同时其pH值决定了电泳液中甘氨酸的低解离度，使得其泳动效率最小，从而在Cl离子后面形成一个低电导、高电压梯度区，最终使得Cl离子和甘氨酸离子之间形成了一个稳定而又不断向阴极移动的界面。样品蛋白质的有效泳动率恰好介于这两种离子之间，从而被浓缩成一狭小的中间层。
另外，梯度胶的灌制有专门的梯度胶混合器，但是我没有用过。另外现在有预制的梯度胶。
假如使用梯度胶的话，胶浓度高低兼顾，理论上较均一浓度的胶效果好一些。

小螺号[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74175
精华 0
积分 291
帖子 321
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2014-4-13 01:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 remonte 于 2014-4-13 01:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你好啊，我现在也在跑18cm得3-10nl的胶条，样品是线粒体蛋白质的材料，不知道是什么原因，图像上一直出现这样的条纹，而且不同的材料之间都有这样纹，从图上看好像是聚焦不好一样，点与点之间有比较多的粘连，8000伏，聚焦64000vh.很长 ...

你的样品是怎么制备的？
线粒体中也是有核酸的，核酸容易导致横纹，尝试着去一下核酸吧。
实验是急不来的，越急越容易出错，慢慢来吧

tieshazhang[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74105
精华 0
积分 338
帖子 436
信誉分 100
可用分 2916
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-5
状态离线

发表于 2014-4-13 01:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

梯度胶的目的不是为了把蛋白分得更开，而是为了在同一块胶上同时分离更多的蛋白质