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标题:【求助】western 成笑脸状

mybioon[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western 成笑脸状


我的western blot跑浓缩胶时好好的，到了分离胶就成了\_/这种形状，两边慢很多，marker条带都是斜的，没法看。而且本来很细一条蛋白线都花了，变得很粗，请教有人遇到过嘛？谢谢！


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hold住[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很可能是你的胶聚合不好，或者配胶时混合不均匀，玻板没有洗干净，局部不小心加热（如不小心放在了水浴锅旁边）等原因。
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发表于 2014-4-13 01:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以呀，先洗了需要再用去离子水冲洗至干净，玻璃洗得干净否我想楼主应该知道怎么判断吧。
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发表于 2014-4-13 01:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢你，我今天把玻璃板使劲洗使劲洗，水浴锅搬到千里之外，马上上样，拭目以待
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发表于 2014-4-13 01:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

已经很多次了，谁能告诉我真是怎么了？
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尘朵朵[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看来是遇到问题了，我觉得是你的电泳槽安得不好，导致running　buffer发生渗漏，漏到电泳槽外，这样的话，轻则跑成你这个样子，重则电泳装置有被烧坏的危险，试着别让调整玻璃板，让running　buffer不要渗漏再试试看．祝好运　．
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发表于 2014-4-13 01:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！我弄了很多次，有没有配胶液的问题呢？比如PH
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能：
凝胶孔径不一致
解决办法：确保凝胶混合物充分混匀
建议：
1、避免使用边缘孔
2、在各上样孔之间留出间隔
3、检查样品孔底部是否平整或水平
祝好运！
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junhun[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的问题大，看看试剂是什么时候配制的，尤其是缓冲液的ＰＨ值。
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mybioon[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位，我重配了电泳缓冲液，在跑电泳。边上的空我加的是marker和上样缓冲液
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