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标题:【求助】SDS-PAGE上样时的一个奇怪现象

舞song[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE上样时的一个奇怪现象


我们进行Western blot实验近一月，最近在SDS-PAGE 上样的时候发现一个奇怪现象：
我们用20ul的加样器每次吸取10ul，用于上样；但当Tip尖端插入电泳液后，会见到电泳液进入Tip头，导致Tip内总液量大于10ul。因此，不能将吸入的10ul完全打出。
请教：
1）这是什么问题？是否是正常的反应？
2）如果不是正常的，那么这种现象是否影响结果？
敬请群友指导？
谢谢！！
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1。这不应该是正常现象，可能你的加样枪有问题。
2。对你的上样量是有影响的，上样不准，最好换一个枪，用别的枪试试。
如果只有一点点电泳液进入tip头，在最后用力按一下，把枪头内的剩余量全部打出。
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发表于 2014-4-13 01:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同意楼上说的 用力按一下把枪头内的剩余打出 这样是不科学不规范的操作
对枪本身也是一种损害
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发表于 2014-4-13 01:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢二位回帖！
上样不太准确倒是小问题。我想知道，这种现象是否表明，我们的电泳Buffer出了问题？进而影响实验结果？？
谢谢！！！
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花想容[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不是电泳buffer出问题的。我遇到过这样的问题，当时是测bca法显色的，10ul的枪缓慢插进pbs液体中，能观察到枪头尖端进了一小段水的，试过几次发现，可能是压枪的手轻轻的动了，以至于产生回吸的力量，这个程度小的没法完全控制啊，容量越小的枪越会有这个问题。wb上样还是用加样器吧：）
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发表于 2014-4-13 01:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Gilson的枪的说明书上说：
放液：
将吸嘴口贴到容器内壁并保持10-40度倾斜
平稳把按钮压倒第一停点，等1秒钟后压至第二停点以排出剩余液体
压住按钮，同时提起移液器，使吸嘴贴容器壁擦过
松开按钮
可见除“用力”按一下外，本身这个动作还是无可厚非的……
Dispense：
Place the end of the tip against the inside wall of the recipient vessel（at an angle of 10o to 40o)
Press the push-button slowly and smoothly to the first stop.
Wait for at least a second; then press the push-button to the second stop to expel any residual liquid from the tip.
Keep the push-button pressed fully down and (while remove the pipette) draw the tip along the inside surface of the vessel.
Release the push-button, smoothly.
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鹿奔奔[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

液体回吸应该不是电泳液的问题
按你的说法，虽然电泳液进入了枪头但是枪头内的上样样品体积并没有发生变化，也就是被稀释了而已，所以打到第二停点的时候，液体应该已经完全打出，不会影响上样体积
当然，不知道你们的枪是什么牌子，有没有对相应操作做严格限制
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lyxsqs[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跟你buffer无关，你吸水一样会有这样的现象，只是存在倒吸的强弱问题。这属于正常现象（毛细现象）。由于液体的表面张力作用，浸润的液体不但能沿着有孔隙的材料上升,还能沿着有孔隙的材料向四周扩散,浸润液体在细管里升高的现象叫毛细现象。
顺便解释哈液体为什么能在枪头内上升呢?我们已经知道,液体表面类似张紧的橡皮膜,如果液面是弯曲的,它就有变平的趋势.因此凹液面对下面的液体施以拉力，使液体沿着管壁上升,当向上的拉力跟枪头内液柱所受的重力相等时,枪头内的液体停止上升。
呵呵，进口枪头估计是材料原因比国产的毛吸现象要小多了。
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seagate[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用微量进样器啊，一二十块钱，一点也不贵，应该不会出现这样的问题
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wiwi[使用道具]
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发表于 2014-4-13 01:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为：
1. 移液器与枪头之间可能不太紧，会出现打不净的现象；
2. tip插入后，不小心按了移液器后又松动可出现回吸；
3. 移液器拔出时手松动了（已按到二档了），极易出现回吸液体打不净现象。
你可以一一排除，找出真正的原因，祝你成功。
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