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标题:【求助】请教二维电泳问题

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发表于 2014-4-13 20:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教二维电泳问题


最近开始做乳酸菌的二维电泳，方法基本按照Bio-Rad说明书
破碎菌体使用超声，请高手帮忙分析分析，问题出在在哪里，多谢


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2014-4-13 20:32
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发表于 2014-4-13 20:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

忘了说，用的是pH 3-10，17 cm胶条，电泳程序也按照Bio-Rad说明书
还有我的上样量是 1 mg，是不是有点儿多？横条纹跟上样量有关吗？
望赐教
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发表于 2014-4-13 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样量太多了吧，一般17cm胶就100-400微克吧，有些还有100以下的
从图中看，你的样品没有提好，这个很重要
一般，横条纹跟样品提的好不好有关
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nikonun[使用道具]
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发表于 2014-4-13 20:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品中含盐多了吧,聚胶的时候没聚好.
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发表于 2014-4-13 20:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢指点
如果上样量多了，那是不是应该有很多点啊，这胶怎么看起来很少呢？
超声之后没有专门除核酸，会不会有影响啊？
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@花开花落@[使用道具]
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发表于 2014-4-13 20:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ有没有做过银染，看看蛋白点的数量和蛋白样品的质量？
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发表于 2014-4-13 20:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个上样量没有1mg吧，楼主测得蛋白浓度就有点问题，估计样品里干扰的东西比较多，聚焦不好
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发表于 2014-4-13 20:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 04906 于 2014-4-13 20:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这个上样量没有1mg吧，楼主测得蛋白浓度就有点问题，估计样品里干扰的东西比较多，聚焦不好

我也觉得可能是样品中的杂质影响了浓度测量
可能会是什么杂质呢？
还想问下DIGE，我做过考染的胶还能银染吗？
怎么看蛋白样品的质量？
我看了一些帖子，还是不太明白，多谢赐教
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发表于 2014-4-13 20:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很重要的一点：更换胶条ph值范围，改成非线性的看看，我发现你的蛋白好像都在中间区域，甚至可以用4-7的
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quiqui008[使用道具]
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发表于 2014-4-13 20:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是等电聚焦过程中的问题啊，蛋白集中于左半部，表现的条带是样品量过大，而右半边没有，确定IPG泡涨是否充分，还有就是样品中杂质的去除，对了，问一下，样品中是否有较高浓度的 SDS？
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