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标题:【求助】怎样对鹅IL-2活性单位的测定

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发表于 2014-4-13 21:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎样对鹅IL-2活性单位的测定


小弟想问一下怎样对鹅鸡IL-2的活性单位进行的测定.因为要上动物实验,注射时应该用活性单位来计算,但自己表达的蛋白的活性怎样计算他的活性单位了?
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阿敏[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目前，这还是禽类细胞因子研究的难题
都说鹅鸡IL-2有活性，但均未定义
关键是缺乏相应种属的敏感细胞系；
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发表于 2014-4-13 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 阿敏 的帖子

我可以自己分离鹅鸡的淋巴细胞，但怎样定义活性单位呢
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发表于 2014-4-13 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

自己分离鹅鸡的淋巴细胞是不标准的，是原代细胞
成分复杂，太粗略了；你做出来，别人不一定能重复出来；
建议看看人IL-2的研究历程
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发表于 2014-4-13 21:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

阿敏你好!我想问你一下如果我要用我用大肠杆菌重组的鸡或鹅IL-2,注射的剂量怎样弄呢.我本想是注射时应该用活性单位来计算,但象你说那样,的确这不规范.我还看见有些文章直接写的用好多毫克,还说是在那参考的,但大肠杆菌重组的鸡或鹅IL-2要复性,如果不用活性单位来比,我认为都不科学.
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发表于 2014-4-13 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 鹅鹅鹅 的帖子

建议查硕博论文数据库和已发表文献，看看毒性如何
国内有专家研究禽IL-2很深入的。
如陈吉刚，齐静，王金勇，周继勇教授等。
cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=1688490')
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发表于 2014-4-13 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我以前打电话问过周继勇教授，他只是说在他文章里有。我看了很多次都没有发现他们是怎样用的。我看他们用做出淋巴细胞原代细胞做MTT，然后用单克隆抗体多克隆抗体排除其他干扰因素从而作出淋巴细胞增殖的最小量（他们设定阳性/阴性》1.5为阳性）。最小量比如说3.5ng，然后就上动物用200ng。他们也没有对鹅鸡IL-2的活性单位进行的测定。我就不懂从3.5到上动物200ng 关系。所以我看了这个好像还是没找到办法。
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发表于 2014-4-13 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
去查查他们的论文和已发表文章
应该有很多信息可以借鉴
既然没有标准，自己就可设计嘛！
不然怎么叫试验呢
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发表于 2014-4-13 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
他们发的文章看了气死个人.Biological activity of refolded rduIL-2 was assessed by
in vitro lymphocyte proliferation assay. The in vitro proliferation of duck SMC was significantly stimulated with 1.6 ng refolded rduIL-2 monomer/well, and was a dose-dependentmanner (Fig. 3). It is easy to quantitate the precise amount of rduIL-2 present in our refolded preparation, because of its simple monomer form. However, no standard
for duck IL-2 is currently available, making evaluations of biologic activity relative only to samples evaluated within the same assay. In addition, the bioactivity can not be measured as U/mg form in our primary splenocytes, because of no avian IL-2-specified cell lines in vitro. Respecting the high purity and refolded monomer form, our refolded rduIL-2 might possess a higher bioactivity unit (>8.6X100000/mg ) than described before .他说没标准细胞系,不好标定.然后就说他的活性一定大于8.6X100000/mg .我想用50%最大反应浓度 EC50,定义为1AU(AU为活性单位).在做MTT做.没有标准细胞系,我就用原代细胞了.但MTT的最大反应浓度有办法做没有?原代细胞有啥影响呢
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发表于 2014-4-13 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
希望大哥大姐帮我看哈.做MTT做,50%最大反应浓度怎样作哦
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